材料及试剂
1.胰岛素标准品(不同浓度的)
2.125 I-胰岛素
3.抗血清
4.第二抗体
5.分析试剂 为0.05 Mol/L pH7.4 PBS液+1%正常兔血清。
6. -计数仪
7.试管、加样器、离心机等
操作方法:
1.按表进行。
胰岛素RIA测定方法(单位:μu/ml)
标准管
待测管
0
10
20
40
80
160
1
2
试管号
1,2
3,4
5,6
7,8
9,10
11,12
13,14
15,16
标准品(不同浓度)
100
待测血清
抗血清(二抗)
分析试剂
混匀,37℃温育2h
125 I-胰岛素
混匀,37℃温育1h
第二抗体
混匀,37℃反应30min
2.测定和计算 反应完毕后,将各管于室温3 000 r/ min离心30min,仔细吸取上清液,收集于放射性废液贮存容器内。用 -计数仪分别测量各管沉淀物(B)的放射性强度(cpm),以两管的cpm均值表示。再以第1,2管的cpm值为Bo,分别计算结合率(B%,即B/Bo×100%),用B%为纵坐标,不同浓度胰岛素标准品为横坐标,绘制标准曲线。然后根据待检管的B%,从标准曲线中即可查得胰岛素的相应含量。
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