多克隆抗体 (Polyclonal antibody)
一. 概念
给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体.
二. 多克隆抗体的应用
免疫学检测
被动免疫治疗和紧急预防
三.存在问题
特异性差, 用于免疫学检测容易出现交叉反应
单克隆抗体 (Monoclonal antibody,McAb)
一.概念:
通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体.
二.B细胞杂交瘤的类型
小鼠-小鼠
大鼠-大鼠
小鼠-人
人-人
三..杂交瘤技术的原理
1.亲本细胞的选择
小鼠骨髓瘤细胞
次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶
(HGPRT) 缺陷型
免疫脾细胞
经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾脏
2. 细胞融合
融合后细胞的类型:
-未融合的脾细胞
-杂交瘤细胞
-未融合的瘤细胞
3 杂交瘤细胞的选择性培养
DNA合成的途径：
融合后细胞在HAT培养基中存活情况
脾细胞（ HGPRT
, TK
, 不能长期生长）
骨髓瘤细胞（ HGPRT
-, TK
-，不能生长 ）
杂交瘤细胞（ HGPRT
, TK
，能够生长）
4.杂交瘤细胞的筛选和
克隆化
筛选：
免疫荧光
ELISA等
克隆化：
有限稀释法
单个细胞显微操作法
软琼脂培养法
5. 单
克隆抗体的生产
体内：BALB/c小鼠体内诱发含有单抗的腹水
体外：无血清培养基悬浮培养等
6. 单
克隆抗体的纯化
硫酸铵沉淀法
离子交换层析
A蛋白-Sepharose亲和层析
四. 单克隆抗体的特性
高度均一性：
纯度很高的均一性抗体
高度专一性：
只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应
大量产生及稳定性：
杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代
五 .单克隆抗体在医学上的应用
（一）用作诊断试剂
1. 检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化 阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。
2. 鉴定病原体，准确诊断传染病。
3. 用于肿瘤的诊断和分型
4. 激素类单抗用于测定体内激素含量，判断内分泌的功能状态
（二）用作研究工具
1.纯化抗原
2.分析和探查抗原结构
3.分析抗原决定簇分子的功能
（三）用于疾病的治疗
1.抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治
2.抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗
3.抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗
单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题
1.单克隆抗体的特异性
由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗，对正常组织有交叉反应
2.异种抗体反应
鼠源性单抗用于人体，导致异源性超敏反应
基因工程抗体 (Genetic engineering antibody)
概念：
根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括 嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。
一. 嵌合抗体(chimeric antibody)
从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。
特点：减少了鼠源性抗体的免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。
二. 单链抗体(single chain antibody)
用基因工程方法，将抗体重链和轻链可变区通过一个连接肽连接而成的重组蛋白。
特点：能保持与抗原结合的性能，分子量小，穿透性强，体内循环半衰期短，免疫原性低。
单链抗体的应用：
1.用于肿瘤的导向治疗
2.肿瘤的影像分布
3.基因治疗
细胞内抗体：在细胞内表达特异性识别某一基因产物的抗体，可干扰该基因产物的生物活性。
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