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  • 酶联免疫吸附试验及其应用

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-04-09    本站论坛

竞争法(测抗原)

抑制性测定法

6

洗涤:重复2

同左

洗涤

7

加入0.2ml底物溶液于每个凹孔,(O.P.DO.T),室温作用30分钟(另作一空白对照,0.4ml底物加0.1ml终止剂)。

同左

同左

同左

8

加终止剂:每凹孔加2M H2SO42M柠檬酸0.05ml

同左

同左

同左

9

观察记录结果:目测或用酶标比色计测定(O.P.D492nmO.D值。

同左

用酶标比色计测定ab两组O.D值,并求出abO.D值的差数

同左


五、ELISA的应用

ELISA应用的范围很广,而且正在不断地扩大,原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原,可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。酶免疫试验(EIA)结合光学显微镜或电子显微镜可进行抗原定位与结构的研究,用酶标记抗原或抗体结合免疫扩散及免疫电泳可提高试验的敏感性。在实际应用方面可作疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此,它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。



检查抗原和半抗原方面:在内分泌方面已经用于检测雌性激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素和孕酮等,其敏感性与RIA相当,在血液学方面可用于检查凝固因子(如第Ⅷ凝固因子)、红细胞抗原及结合球蛋白(Hapto Globin)等,在肿瘤方面已试用检查甲胎蛋白(AFP)癌胚抗原(CEA),对前者的敏感性已达到与放射免疫试验相当的水平,但对CEA检查的敏感性较低,目前尚不能用于常规诊断,在传染病的诊断方面正在日益扩大,其中最满意的是用于检查乙型肝炎表面抗原。国内外已有ELISA检测的商品供应。尚有用于检查霍乱弧菌、大肠肝菌、绿脓杆菌和破伤风梭菌毒素;脑膜炎球菌及淋球菌抗原;检查免疫抑制病人中常见的白色念殊菌抗原,检查病人或病兽的粪便中的轮状病毒,自病人标本中检查甲肝病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、流感、呼吸道融合及巨细胞病毒等。还可用于植物组织浆液中检查植物病毒。此外尚试用于测钩体抗原及血吸虫病的循环抗原等。在免疫化学方面可用于检测白蛋白,免疫球蛋白的各种组份,也可用于检测补体成份,如:ciq,还能用于检测蛇毒。

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