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  • 酶联免疫吸附试验及其应用

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-04-09    本站论坛

检查抗体方面:用ELISA间接法检查抗体,已获得对多种传染病和寄生虫病的血清学诊断,亦开始广泛用于现场流行病学调查。在寄生虫病方面,它用于对疟原虫、阿米巴、利日曼原虫、锥虫、血吸虫、囊虫、弓浆虫、肺吸虫、肝吸虫、血丝虫、旋毛虫病等血清学诊断,这对人医和兽医都很重要。在病原微生物方面已用于检查链球菌、沙门氏菌、布氏杆菌、结核杆菌、麻疯杆菌、霍乱弧菌、淋球菌、假丝酵母菌等的抗体,还可用于破伤风抗毒素和霍乱弧菌抗毒素的测定以及检测斑疹伤寒立克次氏体感染后的抗体,可作诊断。对立克次氏体还可用以鉴别密切有关的种属。也有用于检查鹦鹉热衣原体抗体的报导。试用于病毒抗体检查报告的有:流感病毒、腮腺炎病毒、麻诊、风疹、轮状病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒、腺病毒、肠道病毒、脑炎病毒、黄热病毒、狂犬病毒和脊髓灰质炎病毒等,其敏感性都超过目前常用的检查方法。此外,还可用于鉴定病毒型别,例如疱疹病毒。如能进一步改进方法用于检查特异性IgM,可以作为早期诊断以及了解体内有关抗原的清除情况。在免疫性疾病方面有试用作自身疫病抗体测定以及对过敏的诊断,例如检测各种过敏原的抗体、DNA抗体及甲状腺球蛋白抗体,红斑性痕疮抗体等等。在卫生学方面,可用于检测食品中葡萄球菌肠毒素及沙门氏菌毒素等等。

六、ELISA存在的问题

从以上的简单介绍中可以看出,ELISA法由于本身所具备的优越性,是一项很有发展前途的血清学诊断方法,而且应用的领域也越来越广泛。但是我们认为ELISA不是万应良方,用它来代替一切,这是不当的。因为ELISA法还有局限性:
1、由于ELISA所用的抗原大部分还是混合的可溶性抗原,所以对同一微生物寄生虫或其他物质不同部位的抗原还没有分开。
2、内源性过氧化酶的普遍存在,如人脑组织中,呼吸道分泌物的炎症细胞中及某些病毒的组织培养中均有内源性过氧化物酶的活力,常不易除去,如果用某些方法除去时,则病毒的抗原性亦受到破坏,对于用ELISA检测不利。
3、对ELISA法的非特异性评价的资料尚不够完善,因此,对出现一些非特异性反应的时候,往往不易解释。
4、固相载体的质量常不统一,主要是原料及制备工艺还不一致,致使不同批号的固相载体有时本底值较高,有时吸附性能很差,影响试验结果。
5、试剂不统一,现在处于“八仙过海,各显神通”,标准还不能统一。
下面将ELISA法与免疫荧光(IFA)和放射免疫(RIA)的各自优缺点作一简要的比较(表4),供参考:
表4:三种方法的优缺点比较:

综上所述,ELISA在国内外已使用得非常广泛,但对该法在应用中的评价尚不一致,过去在ELISA法开始建立时有全面肯定的趋势,而在广泛研究和实践中发现了一些缺点,遇到了一些困难,如在重演性问题、特异性问题以及能否考核疗效问题等等。所以在70年代末期也有人采取否定的态度,全面肯定或全盘否定,这些都是不正确的,对一种新方法的建立和深入研究,要采取一分为二的方法加于评价,既要看到方法的优点,也要重视存在的问题,便于进一步研究加以克服。世界卫生组织专家组提出对ELISA的评价认为:“ELISA作为免疫诊断应用是一个好办法,但要做好它不容易。”因此,还需进一步研究改进,加以完善。从而使之成为对多种疾病诊断较为理想的方法是完全可能的。


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