（一）预备试验
1．绵羊红细胞悬浮液的制备 通常用公绵羊红细胞，将绵羊血液采集于带有玻璃珠的无菌容器中，充分振摇，使脱去纤维，此时血液失去凝固性，称脱纤血。
亦可用阿氏液保存血液，阿氏液配方如下：
葡萄糖 24.60g
氯化钠 5.04g
柠檬酸钠（含2个分子结晶水） 9.60g
蒸馏水 1 200ml
溶液配好后，高压（10磅）灭菌10min，也可通过蔡氏滤器灭菌。溶液盛于瓶内，将绵羊血直接采入瓶内，血量应大致与阿氏液量相等。摇匀，置冰箱中保存，可保存3周左右。
用时将血液移入离心管内，加3～5倍量生理盐水，离心沉淀洗涤三次，每次2 000r／min，离心10min，然后去掉上清液，血球泥用生理盐水配成2.50％液应用。
2．溶血素效价测定 溶血素是用绵羊红细胞，经多次免疫家兔，抽取家兔血清，加入甘油而成。在冰箱中可保存二年以上。每隔两、三个月测定效价一次。溶血素可从生物制品厂购买。
溶血素效价测定的方法：先将溶血素稀释成100倍，即0.20ml的溶血素（溶血素实量含0.10ml）加入9.80ml生理盐水混合即可。然后按表6—1配成稀释液：
表6-1溶血素稀释表
另取小反应管一列，按次序从每一稀释液取0.50ml分别加入各管中，添加时应由稀释度大的稀释液加起，这样可不必更换吸管。然后再加入生理盐水1.00ml，1︰20补体和2.50％红细胞悬液各0.50ml。在37℃水浴槽中放20min后判定结果。详细操作程序见表6-2。
表6-2 溶血素效价测定示例
试验中发生全部溶血的溶血素最大稀释倍数（即1︰2 000），微溶血素的效价，亦称一个溶血单位。做正式试验时，溶血素按二个单位稀释使用。在本例中，其使用浓度应为1︰1 000。
3．补体的效价测定 取健康豚鼠3只以上，饲喂前，每只从心脏取血8ml～15ml，注入培养皿内，放入37℃温箱内30min，取出置4℃冰箱内，待血清析出后，吸入离心管中，3 000r／min离心15min，取上清趁新鲜稀释使用。如一次采取大量补体，可定量（1ml～2ml）分装于青霉素瓶内，置低温冰箱冻结保存。避免反复冻融。也可从兽药厂购买冻干补体，在冰箱内可保存三年。
测定和使用补体时，按表6-3进行。
表6-3补体效价测定表
补体效价测完后，按表添加各种成分。所用的致敏血球是将2单位溶血素和2.50％红细胞液等量混合后，置37℃水浴中15min，即成为致敏血球。
在2单位溶血素的存在下，能使0.50ml的2.50％红细胞完全溶血的最小补体量，即为该补体的效价。在本例中，补体效价为1:20稀释液0.25ml。
效价测完后，按下列计算原补体在使用时应稀释的倍数。
0.50／0.25×20.0＝40.00
即此补体应作1︰40稀释使用，每管加入0.50ml，此即为1个单位补体。考虑到补体性质不稳定，在操作过程中效价会降低，故此使用浓度比原效价大10.00％左右较为适宜。因此，本批补体应用1︰36稀释使用，每管加入0.50ml。
4．抗原效价测定 鼻疽补体结合反应抗原是用强毒鼻疽杆菌的混悬液，经高压灭菌，并在冷处浸泡取其滤液制成的。鼻疽抗原可向兽药厂购买。使用时按出厂使用说明书或标签标明的效价稀释应用。如因保存时间过久或其它原因，抗原效价可能发生变化，使用前加以滴定。
⑴抗原稀释：用
生理盐水将抗原原液作成9种稀释液，方法如表6-4。
表6-4 抗原稀释表
⑵血清稀释：取鼻疽强阳性血清和弱阳性血清各一份，用
生理盐水按表6-5做成5种稀释液，在60℃水浴中灭能30min。
表6-5 鼻疽阳性血清稀释表
