2.卵白素中含有约7%的糖类，它可与组织中含糖基的物质起反应，造成背景的染色。
3.卵白素的等电点约10左右，可带较多的负电荷 ，纤维组织可带较多的正电荷，这两种电荷可互相吸引，造成背景的染色。
4.卵白素中有4个结合点，其中一半与连接抗体结合，另一半与复合物结合，如此可降低其敏感性。
（五）碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法 （APAAP，Alkaline phosphatase anti alkaline phosphatase）
1984年Cordellt Massen氏等人创立了APAAP法，该法的基本原理是在加入一抗后，依靠二抗的桥作用，将抗原抗体复合物和APAAP复合物连接起来，然后通过复合物中的磷酸酶对底物的水解，生成鲜红色或蓝色的产物。（鲜红色一般底物采用的是偶氮染料快红（fast red ）或者蓝色快蓝色（fast blue）。
评价：在其它许多方法中，如ABC法和PAP法等，应用的显色剂都是3.3二氨基联苯胺（3,3，diaminobenzidine, DAB），据认为，该试剂有致癌作用，（现已认为它已没有致癌性作用），为了避免使用上述试剂，因而创立了这种方法。它敏感性高，不受组织中内源性过氧化物酶的影响和干扰，可产生出鲜艳的红色或蓝色阳性物，非常容易被鉴别，常被用作双标。
存在问题：
1.切片不能长期保存。因为显色用的是快红或快蓝，这些染料后着染色后的颜色，不能经过酒精的脱水处理，一浸入酒精，所着染的颜色将被全部脱掉。只能用水性胶封片，然该种封片法保存的切片时间不长，一般只有数月即会褪色。
2.切片的透明度较差，不到于拍摄极佳的照片。
（六）免疫金银法（Immunoglold-sliver staining, IGSS）
1978年Geoghegan等首次应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原。1981年Danscher在此基础上改进并发展了用银显影液增强光镜下金颗粒可见性的IGSS。
基本原理：通过免疫反应，沉积在抗原位置的胶体金颗粒起着一种催化作用，用对苯二酚将银离子还原或银原子，被还原的银原子沉积在金颗粒周围形成“银克”。它本身具有催化作用，使更多的银离子还原并促进“银壳”越长越大，最终在光镜下就能看到被放大的黑褐色物质。
评价：该法敏感性高，特异性强，据认为它比PAP法高20倍左右，背景较低，阳性物易辨性好，可用于任何切片，能检测微量的抗原。
存在问题:
1.操作繁锁，步骤较多。
2.需要预先制备成胶体金。
3.需要在暗室中进行。
4. 由于使用的金-银试剂，容易造成沉淀或污染。
（七）LSAB法，(Labeled streptavidin biotin) 或者SP法（Streptavidin）
ABC法虽然是一种很好的方法，但是在实际的应用过程中，确实也存在着许多问题，为了解决和克服存在的问题，90年代初提出了用链卵蛋白素（streptavidin）替代ABC法中的卵白素生物素复合物。该物质是从链菌属蛋白中分离出来的一种蛋白，有四个和生物素亲和力极高的结合点。
评价：LSAB法是目前国内使用最广泛的一种方法，由于它的敏感性强，效果好，背景清晰，无杂质而大受人们的欢迎。其优点有：
1.不需预先形成复合物，分子体积小，行动灵活，对组织参透性强。
2.链卵蛋白素的等电点为5.5-6.7，接近中性，所带的负电荷少，不容易与组织中的正电荷发生相互吸引，因而可降低背景的染色。
3.链卵蛋白素不含糖基，不存在与组织中含糖基类的物质起反应的现象。
4.链卵蛋白素有4个与生物素结合的点，它们可以全部地和2抗上的生物素结合，从而增加其敏感性，从某种意义上讲，它比ABC法的敏感性起码增加一倍以上。
5.节省时间，每种抗体的孵育时间都在10-30分钟左右。
6.抗体可以高度稀释，增加标记病例，降低成本。
7.背景清晰，无非特异性染色，阳性物突出，明显易辨。
8.染色时间短，提高了染色的成功率，经几千例的实验证明，染色成功率几近100%，减少了反复制作的机会，保证了病理报告的及时发出，为病人的治疗和诊断赢得了时间。
（八）EnVision TM Systems
该法是近几年在国内推广使用的一种方法，它的原理是将多个抗鼠和抗兔诉IgG分子与辣要过氧物酶聚合，当形成复合物后，可直接与抗原抗体的复合物聚合在一起，经DAB显色即可完成染色。
评价：
1.该法敏感性更高，效果更好。
2.步骤减少，省时省力。
3.抗体的孵育时间可节省。
4.该系统不含有生物素，可以免除由内源性生物素所造成的背景染色。
5.背景清晰干净，阳性物突出明显。
（九）真空负压LSAB法
该法创立于1992年，几经实验证明，该法效果好，质量高，能节省很多时间，并获得军队科技进步3等奖。其基本原理是：
各种物质的分子在真空负压的条件下，由于失重而飘游起来，从而增加了各物质分子间的碰撞机会，加速了抗原抗体的结合，使反应提前完成。
特点：
1.省时，全过程由过去的十几小时缩短为1-1.5小时，为患者获得更多的时间。
2. 抗体可高度稀释，可达厂家推荐的稀释度高1-2倍，增加标记的病例，降低成本。
3.不需要用酶消化，简化了步骤；保证了染色的成功率，减少了返工的现象，节省了人力物力。
4.全部过程不需加温，减少摸索温度的麻烦，条件易控制。
5.不受其它条件的限制，每次可大量染片，多至百余张。
6.阳性反应物颜色鲜艳，色彩迷人，背景清晰，无非特异性染色，结果易判断。 上一篇：免疫组化阳性病例的评判及相关问题 下一篇：直接凝集反应技术（Direct
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