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免疫电泳技术（Immunoelectrophoresis

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

电泳槽加缓冲液至2／3～4／5的槽体积，注意两侧一样多，以免造成液面差，产生虹吸作用，影响电泳。
当蛋白质泳动至槽内后，就应该更换缓冲液。有人认为长久电泳过的电泳液易于把血清中各成分分开，而新配制的则差一些。为了防止缓冲液离子强度的改变，可以在每次电泳时更换正负极（这是目前广泛采用的）；也可以在下一次电泳前，将两槽内的缓冲液混合后再用。但也有人认为不能混合再用，必须更新。
（六）电场强度的显示
以V／cm长或I／cm宽表示。电压的测量必须用电压表测量凝胶板两端的电压差，再除以板长，而不能以电泳仪上的电压数表示，当然这两者有一定的相关性。电泳仪上的电流强度除以凝胶板宽即可代表电场强度。在实际工作中，很难有两项指标都符合的调控，因此只能根据取其一个指标进行调控，一般多按电流计算。
（七）结果观察与标本的保存
对于与免疫有关的电泳，一般能形成明显的抗原抗体复合物，因此可以直接观察。也可以染色观察。染色后同时也起到了保存标本的作用。具体步骤如下：
1．将琼脂板放入生理盐水中4℃浸泡2天～3天，每天换液数次，以洗去多余的蛋白质。
2．染色将洗好的琼脂板放入氨基黑或偶氮胭脂红染色液中染色15min～30min。
0.5％氨基黑染色液的配制：
氨基黑4B（10B也可） 0.50g
甲醇 5ml
冰醋酸 10ml
H₂O 40ml
0.75％偶氮胭脂红染色液的配制：
偶氮胭脂红 1.50g
甲醇 100ml
冰醋酸 20ml
H₂O 80ml
先将染料放入研钵中，边研磨边加甲醇，使染料充分溶解，再加冰醋酸，最后加蒸馏水，以滤纸过滤，置棕色瓶保存。
3．脱色染色后，将琼脂板放入脱色液中脱色，至琼脂板底色脱净为止，脱色液要勤换。
脱色液的配制：
乙醇 45ml
冰醋酸 5ml
H₂O 50ml
脱色液用过后，可用活性炭吸附染色颗粒，过滤后，可再使用。
4．漂洗用蒸馏水漂洗。
5．制膜把琼脂胶滑到玻璃纸上，下垫一玻璃块，展平玻璃纸。在琼脂表面上抹一层甘油（以防干裂），放37℃温箱烘干即可。也可以先制膜后染色。
对于非免疫性电泳标本的染色基本同于免疫电泳。但不要进行漂洗，电泳后直接投入染色液中或固定后投入染色液中。
6．标本的保存主要是染色后拍照保存，也可制膜保存。
（八）电泳的分类
1．根据支撑物的不同可分为：
⑴凝胶电泳：如琼脂电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
⑵纸或纤维素膜电泳：如滤纸电泳、醋酸纤维膜电泳、硝酸纤维素膜电泳等。
⑶粉末电泳：如淀粉、纤维素粉电泳等。
2．根据电场强度的不同可分为：
⑴低压电泳：电场强度1V/cm～5V/cm，电泳时间较长，可数小时至十几小时。
⑵中压电泳：电场强度5V/cm～20V/cm，电泳时间一般数分钟至数十分钟。
⑶高压电泳：电场强度20V/cm～200V/cm，电泳时间短，一般为数分钟至数十分钟。
3．根据离子强度的不同而分为：
⑴连续电泳：是指电泳槽缓冲液的类型与离子强度和玻璃板上支撑物的一致。
⑵非连续电泳：使电泳槽内缓冲液的类型与离子强度和玻璃板上支撑物的不一致。一般常采用琼脂板的离子强度为电泳槽的一半。

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