| (一) 原理
IL-2主要由活化T细胞产生，又为T细胞增殖所必需，故称T细胞生长因子（ T Cell Growth factor, TCGF ）。IL-2产生的水平反映T细胞的功能，牪;仅是免疫调节重要的研究对象，而且与临床多种疾病密切相关，CTLL是C57BL／6来源的。犘!鼠杀伤性T淋巴细胞细胞系，由Gills 1977年建立，只有在IL-2存在的培养基中才能生长。因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL-2的水平。除CTLL外，丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL-2活性的指示细胞。
(二) 方法
可根据实验室条件，选用３H-TdR掺入法和MTT法
1. ３H-TdR掺入法
IL-2依赖的CTLL用10％FCS RPMI1640洗涤
2次，每次1000rpm, 5min, 除去原培养液中的IL-2
↓
调整活细胞数1×10５／ml
↓
96孔平底培养板中每孔加100μl
CTLL悬液(1×10４／孔)
↓
加入不同稀释度标准IL-2和待测样品
↓
37℃CO孵箱，培养18～24h
↓
每孔加３H-TdR 0.5μci／50μl
↓ 4-6h
用细胞收集仪收获于玻璃纤维纸上
↓
干燥后，移入液闪瓶中，加入1ml闪烁液，
于液闪仪中测β射线的cpm值
↓
计算(举例)
将标准IL-2不同浓度和待测样品不同稀释度时所获得的cpm值作图，犠]轴采用概率座标(probit)，横座标为Log2稀释倍数。从50％的最高cpm值画一横线，犛k标准和待检斜线的交点，即可计算出待检样品IL-2的活性单位。
如标准品50％最大cpm值时为1u／ml，则待测标本1∶4时为1u／ml,原液则为4μ/ml
2. MTT法
MTT(3-(4,5-dimcthylthioazol-2-yl)-2，5-diphenyl-tetrazolium bromide , 四甲基偶氮唑盐)可作为线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成紫兰色的甲 (Formazan)，将结晶的甲 溶解释放，可根据所测的OD值反映活细胞的数量和活性，从而推知待检样品中IL-2的水平。在掌握良好的实验条件下，MTT法的敏感性可接近３H-TdR同位素掺入法。
IL-2依赖的CTLL用10％FCS RPMI1640洗涤2次，
每次1000rpm, 5min, 除去原培养液中的IL-2
↓
调整活细胞数1～2×10５／ml
↓
96孔平底培养板中每孔加100μl
CTLL悬液(1～2×10４／孔)
↓
加入不同稀释度标准IL-2和待检样品，100μl／孔，
每份设3个重复孔
↓
CO孵箱培养18～24h
↓
每孔加10μl MTT(5mg／ml溶于PBS)
↓ 4h，37℃
轻轻吸出150μl上清，加入150μl二甲亚砜(DMSO)
或酸性异丙醇(异丙醇溶于0.04N HCl)
↓
溶解10min，测OD值(570nM)
(三) 试剂和器材
1. IL-2依赖的CTLL
2. 10％FCS RPMI1640
3. ３H-TdR
4. 标准IL-2
5. MTT, 酸性异丙醇，二甲亚砜(DMSO)
6. PPO，POPOP，二甲苯
7. 9999型玻璃纤维滤纸
8. 96孔平底培养板
9. 细胞收集仪
10. CO孵箱
11. β液闪计数仪
(四)注意事项
1. CTLL细胞洗涤要充分，但操作必须轻柔，离心速度不宜过高，否则影响细胞的增殖。
2. 避免同位素污染。
3. 加标准IL-2或待测样品时，按从低浓度到高浓度顺序加。
4. 加入３H-TdR最适时机是阴性对照细胞开始全部死亡。
5. CTLL细胞冻存后复苏较困难，用含有丝分裂原条件培养基长期培养容易发生变异。
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