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免疫血清的制备实验

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动物血清中可出现大量特异性抗
体，这种含抗体的血清称为免疫血清。优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和
免疫原性，以及动物应答的能力。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时
间间隔、有无佐剂等因素。
本实验以兔抗根瘤菌血清的制备为例说明。
【材料】
1. 菌种：艾特利根瘤菌（Rhizobium etli）。
2. 动物：2-3kg的健康雄家兔或未怀孕的雌家兔。
3. 药品、试剂：生理盐水，完全福氏佐剂，1%硫柳汞。
4. 器材：一次性注射器，碘酒酒精棉球，10×100试管，100ml血清瓶。
【方法】
1. 制备抗原：用YMA斜面培养艾特利根瘤菌3天，用0.5%石炭酸生理盐水洗涤3次后制成悬液；100℃水浴处理1h，用麦氏比浊管将菌液浓度调至10⁹个/ml，保存于50ml血清瓶备用，加一滴1%硫柳汞防腐，于4℃冰箱保存。
2. 免疫兔子：以艾特利根瘤菌菌悬液为抗原按表3.1对兔子进行免疫。
表3.1 免疫日程表

取2ml抗原与2ml完全弗氏佐剂于小烧杯，60℃水浴中充分混合（用无针头1ml一次性注射器来回抽吸）。取1ml抗原-佐剂混合物注射兔子后腿肌肉。两周后，不加佐剂对兔子进行静脉注射，抗原剂量为1ml。四周后，再对兔子进行一次静脉注射。
3. 抗体效价测定：最后一次注射7天之后，对兔子进行耳缘静脉取血5ml。待血液凝固后
吸出血清，保存于10ml血清瓶中。取10支血清管（10×100试管），用生理盐水按图3.1对免疫血清进行稀释。另取2支相同试管作对照，编号为11和12，取2.5ml生理盐水分别加入这2支试管中。在1-11号管中加入抗原2.5ml，在12管中加2.5ml生理盐水。将12支试管放入60℃水浴中1h后，观察实验结果，出现絮状沉淀的最高稀释度即为抗体的效价。

4. 心脏采血：当抗体效价达到1/1600时，开始大量采集抗体。用20ml注射器从兔子心脏采血25ml，放入100ml血清瓶中，待血清析出，用移液管转入另一血清瓶中，加1滴1%柳硫汞防腐，置-20℃冰箱保存备用。
【结果】
观察血清的量及颜色，并做好标记。
【注意事项】
1．免疫家兔时注意无菌操作，以防感染。
2．分离血清时所用器皿要干燥、清洁以防溶血。

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