酶联免疫吸附试验(ELISA)操作要点
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酶联免疫吸附试验(ELISA)操作要点

点击:   作者:   来源:  时间: 2007-04-09  本站论坛
A值,现举某种检测抗HBc的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照为不含抗HBc的复钙人血浆,阳性对照中抗HBc含量为125±100u/ml。每次试验设2个阳性对照和3个阴性对照。测得A值后,先计算阴性对照A值的平均值(NCX)和阳性对照A值的平均数(PCX),两个平均数的差(N-P)必须大于一个特定的数值(例如0.300),试验才有效。3个阴性对照A值均应小于2.000,而且应≥0.5×NCX并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范围,则弃去,而以另2个阴性对照重新计算×NCX;如有2个阴性对照A超出以上范围,则该次实验无效。阳性判定值按下式计算:

阴性判定值=0.4×NCX 0.6×PCX

标本A值≤阳性判定值的反应为阳性,A>阳性判定值的反应为阴性。

b. 抑制率法

抑制率表示标本在竞争结合中标本对阴性反应显色的抑制程度,按下式计算:

抑制率(%)= (阴性对照A值-标本A值)×100%/阴性对照A值

一般规定抑制率≥50%为阳性,<50%为阴性。

定量测定

ELSIA操作步骤复杂,影响反应因素较多,特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致,因此在定量测定中,每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA,标准曲线的范围一般较宽,曲线最高点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数纸,以检测物的浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接,所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于平坦,中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。


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