网站地图	本站论坛
高级搜索	收藏本站

热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

	当前位置：试验方案>蛋白试验>免疫学> 正文

抗体的制备原理与方法

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

　　S=y/Z×100%
　　S：交叉反应率，y：IC50时抗原浓度，Z：IC50时近似抗原物质的浓度。
　　如某抗原的IC50浓度为90Pg/管，而一些近似抗原物质IC50浓度几乎是无限大，可以说这一抗血清与其它抗原物质的交叉反应率近似零，即无交叉反应，该抗血清的特异性是好的。
　　3．亲合力　　在免疫学中，亲合力是指抗体与结合抗原体的活度或牢固度。抗体与抗原结合疏松，结合后会迅速解离，称为亲合力低，反之，亲合力高。亲合力的高低是由抗原分子的大小，抗体分子的结合位点与抗原的决定基之间的立体结构型的合适程度决定的。亲合力常以亲合常数K表示。K的单位是升/摩尔（L/mol）。在RIA中，K是该抗血清能达到的最小检出量（灵敏度）的倒数，K=1/(H)，(H)是最小检出量，通常，K的范围在108～1012L/mol之间，也有高达1014L/mol的。
　　计算亲合常数的方法20余种，计算出的K都不能真实反映实验情况，只能作为参考。
　　（七）免疫失败的可能原因及应采取的措施
　　有时不能获得满意的抗血清，可从下列几方面找原因，并改进之。
　　（1）免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量。
　　（2）抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也可考虑改变抗原分子的部分结构，或改进提取方法。
　　（3）制备的免疫原是否符合要求，可从偶联剂，载体、抗原或载体的比例、反应时间等多方面去考虑，并加以改进。
　　（4）所用的佐剂是否合适，乳化是否完全，可改用其它佐剂，或加强乳化。
　　（5）免疫的方法、剂量，加强免疫的间隔时间和次数，免疫的途径是否合适。
　　（6）动物的饲养是否得当，如营养（饲料、饮水）、环境卫生（通风、采光、温度）是否符合要求，动物的健康情况是否良好等。

　　二、单克隆抗体的制备

　　1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。

　　免疫细胞化学的技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来的细胞群所产生的，所以它的免疫球蛋白属同一类型，质地纯一，而且它是针对某一抗原决定簇的，因此特异性强，亲合性也一致。单克隆抗体（McAb）的特性和常规血清抗体的特性比较见2-3。

表2-3 单克隆抗体（McAb）和常规免疫血清抗体的特性比较

项目

常规免疫血清抗体

McAb

抗体产生细胞

多克隆性

单克隆性

抗体的结合力

特异性识别多种抗原决定簇

特异性识别单一抗原决定簇

免疫球蛋白类别及亚类
上一篇：Cellular 下一篇：免疫组化非特异性背景染色及其控制方法
共7页: 上一页 [1] 2 [3] [4] [5] [6] [7] 下一页
　