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Fab片段的制备方法

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

利用胃蛋白酶分解IgG，将抗体断链为Fab和Fc片段。具体操作方法如下：

1．将IgG粉末100mg，溶于2ml0.10Mol/L pH4.0醋酸缓冲液。溶液稍成白浊，30℃，保温10min。

2．取结晶胃蛋白酶1.50mg，溶于1.50ml 0.10Mol/L pH4.0醋酸缓冲液，加入上述溶液中，于30℃作用16h。

3．用0.10Mol/L pH8.0 PBS透析一夜。

4．加入硫醇使成0.10mol/L，在室温下搅拌30min。

5．加入1Mol/L的碘乙酰胺（Indoacetamide）使成为0.10Mol/L，室温下搅拌1h。

6．用0.01Mol/L PBS 1 000ml透析过夜，3 000r/min，离心30min，去沉淀。

7．以上清过SephadexG100(40cm×2.0cm)以0.10Mol/L PBS洗脱。

8．以每管6ml收集，约在第8管开始，Fab片段被洗脱。

9．测OD280nm，将Fab管合并，浓缩、冻干。

10．如制备F(ab)₂，上述4～6步骤则可以省略。

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