| 免疫球蛋白含量定量检测规程 | 点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 本站论坛
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|  | 适用范围
本标准规定了保健食品中免疫球蛋白 IgG的测定方法。
本标准适用于片剂、胶囊、粉剂类型保健食品中免疫球蛋白 IgG的测定。
本方法检出限：当取样量 0.1g，稀释至25mL，进样量20μL时，检出浓度为0.5mg/mL。
原理
根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白 IgG与配基连接，在pH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。
试剂
流动相 A：pH6.5 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液
流动相 B：pH2.5 0.05mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液
IgG标准贮备液：称取IgG标准品（Sigma化学公司）0.0100g,用流动相A（3.1）溶解并定容至10.0mL,摇匀，浓度为1.0mg/mL。
IgG标准系列溶液：取IgG标准贮备液，用用流动相A（3.1）稀释成含IgG 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0mg/mL的标准系列。临用时配制。
仪器和设备
高效液相色谱仪具紫外检测器和梯度洗脱装置。
分析步骤
试样处理：称取 0.1g（精确至0.001g）试样，用流动相A（3.1）稀释至25.0mL,摇匀，通过0.45μm微孔滤膜后进样。
5.2.1 先用5倍柱体积的重蒸水洗柱，再用10倍柱体积的流动相A（3.1）平衡柱，进样，按洗脱程序进行洗脱。
5.2.2 HPLC参考条件
色谱柱： Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1mL。
波长： 280nm
进样量： 20μL
梯度洗脱表：
Time Flow mL/min A% B% Gradient
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0 0.4 100 0 ※
4.5 0.4 100 0 6
5.5 0.4 0 100 6
15.0 0.4 0 100 6
15.5 0.4 100 0 6
22.0 0.4 100 0 6
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结果计算
C × V × 100
x= ─────——──
m × 1000
式中 x：试样中IgG的含量，g/100g；
m：试样的质量，g；
C：被测液中IgG的含量，mg/mL；
V：试样定容的体积，mL。
计算结果保留二位有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10％。
色谱图
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