| 基本原理
通过定量地观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况,反映小鼠巨噬细胞的吞噬能力。
材料和仪器
l 5%鸡红细胞生理盐水悬液
l 37℃孵箱
l 固定液:1:1 丙酮-甲醇溶液
l 染色液:4%(V/V)Glemsa一磷酸缓冲液
l 垫有湿纱布的搪瓷盒
操作步骤
1 取体重 18一22g 的健康小白鼠.随机分成给药组试验组、阴性对照组和阳性对照组。
2 每鼠腹腔注射 5%鸡红细胞生理盐水悬液0.5ml。
3 8-12小时后,颈推脱臼处死小鼠;正中剪开腹壁皮肤,经腹膜注入生理盐水2m1,轻轻按揉鼠腹部 1分种,然后吸出腹腔洗液 lml,分滴于两片载玻片上,放人垫有湿纱布的搪瓷盒内,移置37℃孵箱温育30分钟。
4 以生理盐水漂洗,以除去未粘片的细胞,晾干。
5 1:1 丙酮-甲醇溶液固定5分钟。
6 4%(V/V)Glemsa一磷酸缓冲液染色3分钟,用流水冲洗,晾干。
7 结果判定:油镜下计数巨噬细胞,每片 200个按下式计算吞噬百分率和吞噬指数。
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吞噬百分率=
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吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数
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× 100%
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200个巨噬细胞(吞及未吞噬的)
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吞噬指数=
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被吞噬的鸡红细胞
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÷2
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200个巨噬细胞
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在计数时,应同时观察鸡红细胞被消化的程度,借以判定巨噬细胞吞噬和消化功能.通常分为4级:
I级:未消化。被吞噬的鸡红细胞完整,胞质浅红或浅黄绿色,胞核浅紫红色。
II级;轻度消化。胞质浅黄绿色,胞核固缩呈紫蓝色。
III级:重度消化。胞质淡染,胞核呈浅灰黄色。
IV级:完全消化。巨噬细胞内仅见形态类似鸡红细胞大小的空泡,边缘整齐.胞核隐约可见。
注意事项
1. 实验过程中应注意无菌操作。
2. 若筛选免疫抑制药,预先可用巨噬细胞诱导剂,在实验前3—4天,腹腔注射 0.5%淀粉生理盐水溶液,每鼠 0.5ml。免疫增强剂多可激活小鼠腹腔巨噬细胞,并增强其吞噬功能一般不再使用巨噬细胞诱导剂。
3. 若滴片染色过深,可用1%HCI脱色;过浅则可复染。
4. 每鼠两片的计数应基本一致,若差距过大,应予淘汰。由小鼠腹腔吸出的液体为出血性渗出液时,不宜使用。
5. 必要时用低渗法溶解胞外红细胞,这样容易鉴别细胞内外的鸡红细胞。
6. 本法简便.但难于测定吞噬速率及其动力学改变,而且费时。
参考文献
1. 巴德年 1998 当代免疫学技术与应用.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,261-263
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