| 基本原理
体液或分泌物中溶菌酶活性可以通过检查其对指定敏感菌株的裂解作用来进行测定，在混有菌液的琼脂疑胶上打孔，将检品放在孔内，一定时间后测定溶菌环的直径。可反映溶菌酶的活性。
材料与仪器
l 菌种：溶壁微球菌（Micrococus Lysodeilicus）是从空气中分离出的一种革兰氏阳性球菌，菌落呈黄色，普通培养基上生长良好，１ 个月传代１次或冻干成菌种保存。
l PH6.4,1/15M磷酸盐缓冲盐水（ＰＢＳ）
①1/15M磷酸二氢钾溶液：磷酸二氢钾9.04g,，加蒸馏水至1000ml。
②1/15M磷酸氢二钠溶液：磷酸氢二钠·2H2O11.87g，加蒸馏水至1000ml。
③PH6.4, 1/15M PBS： 1/15M磷酸二氢钾溶液73ml, 1/15M磷酸氢二钠溶液27ml，氯
化钠0.5g 混匀，溶解即成。
l 溶菌酶标准品：结晶纯品。
l 普通琼脂培养基
操作步骤
1. 菌液制备：将溶壁微球菌接种于普通琼脂斜面上，37℃ 培养 24一36小时．用 PH6.4、1/15M PBS洗下，配成混悬菌液。用72型分光光度计波长640nm测定，并调整其浓度达到透光率３０—40％。
2. 溶菌酶标准液：称取溶菌酶标准纯品，用PH6.4、l／15M PBS配成1000ug/ml原液，放冰箱保存。临用时再稀释成100、50、25及10ug／ml标准液。
3. 加热融化1.2%琼脂粉，待冷却至60-70℃时将溶壁微球菌混入摇匀，使其浓度为1mg/ml，立即倾入已夹好的两玻片中（厚度为4mm）。
4. 待琼脂凝固后，以15mm间隔，用打孔器穿钻2.5mm直径小孔，每孔中加入20ul检样品，并在同一板上加上不同浓度的标准溶菌酶样品，置24-26℃，12-18小时，用测微尺测溶菌环的直径。
5. 用半对数纸（以溶菌酶浓度为纵坐标，即对数坐标，溶菌环直径为横坐标）绘制标准曲线。从线上查出每毫升样品所含溶菌酶的ug数。
注意事项
在缺乏培养细菌的条件下也可使用干菌粉，将溶壁微球菌24小时培养物用60倍体积蒸馏水洗下，离心沉淀弃上清液，沉积的菌体加约5倍体积的丙酮，用玻棒搅匀，放冰箱内30分钟、取出离心沉淀弃上清液。按此法用丙酮浸洗3次，再用乙醚洗2次，将菌体放于燥器内过夜，即得干菌粉。用乳体研碎备用，使用时称干菌粉500mg，放人上述磷酸缓冲液约50ml，如上调整菌液浓度约30一40%.
参考文献
刘辉 2000 研究生免疫学教程 大连 大连出版社 260－261
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