Mclean和Nakane等认为,最佳的混合是:含0.01mol/L的过碘酸盐、0.075mol/L的赖氨酸、2%的多聚甲醛及0.037mol/L的磷酸缓冲液。
6.Karnovsky’s液(pH7.3)
试剂:多聚甲醛 30g
25%戊二醛 80ml
0.1mol/L PB 至1000ml
配制方法:先将多聚甲醛溶于0.1mol/L PB中,再加入戊二醛,最后加0.1mol/L的PB至1000ml,混匀。
该固定剂适于电镜免疫细胞化学,用该固定液在4℃短时固定,比在较低浓度的戊二醛中长时间固定能更好地保存组织的抗原性和细微结构。固定时最好先灌注固定,接着浸泡固定10~30min,用缓冲液漂洗后即可树酯包埋或经蔗糖溶液后用于恒冷切片。(www.51protocol.com)
7.0.4% 对苯醌 (Parabenzoquinone)
试剂:对苯醌 4.0g
0.01mol/L PBS 1 000ml
配制方法:称取4.0g对苯溶于1000ml 0.01mol/L的PBS即可。
对苯醌对抗原具有较好的保护作用,但对超微结构的保存有一定影响,故常与醛类固定剂混合使用。一般要求临用前配制,且避免加热助溶,因加热或放置时间过长,固定液变为棕色至褐色,会使组织标本背景增加,影响观察。此外,对苯醌有剧毒,使用时避免吸入或与皮肤接触。
8.PFG液(Parabenzoquinone-Formaldehyde-Glutaraldehyde fixative, PFG)
试剂:对苯醌 20g
多聚甲醛 15g
25%戊二醛 40ml
0.1mol/L二甲酸钠缓冲液 至1000ml
配制方法:先以500ml左右的二甲酸钠缓冲液溶解对苯醌及多聚甲醛,然后加入戊二醛,最后加入二甲酸钠缓冲液至1000ml充分混合。
对苯醌与戊二醛及甲醛联合应用,即可阻止醛基对抗原的损害,又不影响超微结构的保存,故适于多种类抗原的免疫细胞化学,尤其是免疫电镜的研究。
9.碳二亚酰胺-戊二醛(ECD-G)液
试剂:0.05mol/L PB 500ml
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