免疫细胞化学常用试剂-缓冲液

免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。

　　1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）

　　试剂： NaH2PO4·2H2O

　　Na2HPO4·12H2O

　　配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。

　　（1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2o 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。

　　（2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2o 71.632g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2o 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。

　　 （3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。

　　2．0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（Phosphate Buffered Saline, PBS）

　　试剂：0.2mol/L PB　　　50ml

　　NaCl 　　　　　　　　　8.5～9g(约0.15mol/L)

　　重蒸水 　　　　　　　　至1000ml

　　配制方法：称取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。

　　PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.25～7.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/l PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。

　　3．Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液

　　试剂： NaH2PO4·H2O　　3.31g

　　Na2HPO4·7H2O　　　　　33.77g

　　重蒸水 　　　　　　　　至1000ml

　　配制方法：同前

　　该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。