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免疫荧光实验方法及分类

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-11-14 　本站论坛

   抗原对照：已知抗原加正常同种动物标记球蛋白溶液染色，应无荧光。
   阻抑试验：标本滴加同种未标记抗体感作30min后，再加标记抗体，镜检应无荧光现象。
   种属抗原染色：标记抗体与种属抗原标本染色，应无荧光出现。
   阳性对照：标记抗体与已知抗原染色，应呈强荧光反应。对照染色可根据条件适当选择。
   (2)间接法染色
   该方法可用于鸡传染性支气管炎病毒抗体及其它禽病病原及抗体的检测。优点是既能检测病原又能检测相应抗体。如检查抗原，于被检标本上滴加已知的未标记抗体溶液；如检查抗体，于已知抗原标本上滴加待检血清。
   ① 标本经固定后，于被检标本上滴加已知未标记的抗体（或抗原）置湿盒37℃感作30min。
   ② 先以pH7.2PBS冲洗，然后浸泡于三缸PBS中，每缸3min并注意振荡。
   ③ 弃掉PBS，用吸水纸吸干。
   ④ 滴加相应的抗球蛋白荧光抗体，置湿盒37℃感作30min。
   ⑤ 以上以PBS浸洗3次，最后用蒸馏水洗1次，缓冲甘油封片后镜检。
   ⑥ 对照染色间接法首次试验设置对照，随后可酌情减少。
   间接荧光抗体染色的对照试验
   ①被检标本加抗球蛋白荧光抗体，应无荧光出现。
   ②标本先以相应正常动物的血清处理30min，水洗后再以抗球蛋白抗体染色，应无荧光出现。
   ③阳性对照　已知阳性标本加相应的特异性免疫血清，然后再以抗球蛋白荧光抗体染色，应出现特异的明亮荧光。
   抗原（标本）  第一步应用的试剂第二步应用的试剂结果
   同种的  无或用PBS 无或用PBS 无荧光现象
   SPF鸡血清标记抗球蛋白荧光抗体无荧光现象
   特异性抗血清标记抗球蛋白荧光抗体强荧光
   特异性抗血清标记SPF血清球蛋白荧光抗体无荧光现象
   异种的  特异性抗血清标记抗球蛋白荧光抗体无荧光现象

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