1、染色过强
|
原因 |
解决办法 |
| 抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长 |
降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体）抗体孵育时间：室温1小时或4℃过夜 |
| 孵育温度过高，孵育温度超过37℃ |
一般室温20-28℃ |
| DAB显色时间过长或DAB浓度过高 |
显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准 |
2、非特异性背景染色
|
原因 |
解决办法 |
|
操作过程中冲洗不充分 |
每步冲洗3×5 |
|
组织中含过氧化物酶未阻断 |
可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长 |
|
组织中含内源性生物素 |
正常非免疫动物血清再封闭 |
|
血清蛋白封闭不充分 |
延长血清蛋白封闭时间 |
3、染色弱
|
原因 |
解决办法 |
|
抗体浓度过低，孵育时间过短 |
提高抗体浓度，孵育时间不能少于60分钟 |
|
试剂超过有效使用期 |
及时更换试剂 |
|
操作中，滴加试剂时缓冲液未沥干，致使试剂稀释 |
每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液（但防止切片干燥） |
|
室温太低，低于15℃ |
若室温低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟（或4℃冰箱过夜） |
|
蛋白封闭过度 |
封闭时间不要超过10分钟 |
4、染色阴性
|
原因 |
解决办法 |
|
操作步骤错误 |
重新试验，设立阳性对照 |
|
组织中无抗原 |
设立阳性对照片，以验证实验结果 |
| 一抗与二抗种属连接错误 |
仔细确定一抗与二抗种属无误 |
上一篇：Histochemical assays for plant sections 下一篇：免疫组化常见问题及解决方法
