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免疫病理学技术应注意的关键问题

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-11-02 　本站论坛

（四）、其它：
免疫组化染色经常出现很多异常问题，这就要从一开始查照原因，采用逐一排除法，最终总能找到问题的所在。
1、对照片的设置与所想结果不一致，
2、该出阳性而出现弱阳性。首先要考虑到处理组织的抗原数量丢失；其次抗原修复是否充分；再次一抗的浓度或孵育时间或抗体有效期；最后每步清洗时切片上冲洗液控净。但只要对照出现相应结果，组织检测弱阳性，应考虑组织处理的问题。

3、非特异性染色的出现
A、是否有效地去除内源性酶和生物素。
B、非免疫血清封闭是否正确。
C、一抗要合适，过高的浓度极易出现非特异性。
D、每步的冲洗是否干净。
E、组织切片在操作过程中是否曾经干涸。
F、DAB配置、使用、浓度是否准确。
G、检测系统是否与组织内源性蛋白有交叉反应。

（五）、免疫组化染色结果可
能出现的问题及解决办法
• 出现假阳性的几种原因
• 出现假阴性的几种原因
• 出现背景着色的几种原因
1、出现假阳性的几种原因
A、抗体工作浓度不正确
B、部分多克隆抗体由于特异性等问题出现的异常表达(抗体、抗原有交叉)。
C 抗体与组织中某些成分的非特异性结合
D 内源性酶的显色
E 抗原的弥散或被瘤细胞吞噬而使抗原在不该出
现的部位出现，如何杰金病RS细胞中的免疫球蛋
F 异位抗原的表达，如浆细胞有的表达角蛋白
2、出现假阴性的几种原因
A、抗体和检测试剂盒配对是否正确
B、抗体失效
C、孵育的时间太短
D、固定方法和温度不正确
E、染色步骤错误
F、染色过程中切片干燥
3、出现背景着色的几种原因
A、内源性过氧化酶未完全阻断
B、正常动物血清使用不合理
C、脱蜡不够彻底
D、组织粘贴剂使用不当
E、PBS冲洗不够
F、抗体浓度选择不当
G、底物显色时间太长

免疫组化应用中的注意事项
1、免疫组化结果的判断原则
A、必须设对照
B、抗原表达必须在特定部位
C、阴性结果不能视为抗原不表达
D、免疫组化与HE切片诊断应以HE诊断为准
E 、注意抗原的“例外”表达和联合表达

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