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醋酸纤维膜电泳

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

醋酸纤维膜电泳是一项简便而又迅速的方法。它的优点是：①电泳区带分离清楚，比琼脂平板电泳分辨率高；②可以定量；③样品用量少，只需要几微升即可。

（一）材料与试剂
1．pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液
2．0.5％氨基黑染色液
3．透明液：
冰醋酸 3 份
95％乙醇 2 份
混合即可
4．醋酸纤维膜

（二）操作方法
1．将醋酸纤维膜条浸于巴比妥缓冲液中，浸透后用竹镊子夹到滤纸上，吸去过多的水分。将膜的光滑面向下搭在电泳槽两侧的滤纸桥上，注意搭平。
2．加样用微量加样器于负极端1.5cm处加样1µl～3µl，注意样品要成一条直线且垂直方向。也可用血球计数板盖玻片蘸取样品轻轻点上。
3．电泳电压10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm电泳45min～60min，至电泳区带展开约2.5cm～3.5cm时，关闭电源。
4．染色将膜浸于氨基黑染色液中，染色数分钟。
5．透明将染色的醋酸纤维膜浸于透明液中，漂洗5min ~10min，至背景呈乳白色为止。为了防止膜上出现许多气泡，可以逐渐升高透明液浓度10％、20％以至30％。
6．结果观察及保存透明后，将膜贴于玻璃上，干后取下，即可观察结果并保存。
7．定量将各区带剪下，分别浸于4Mol/L NaOH 4ml中，振摇数次，约2h，色泽被浸出，于580nm～620nm比色，测出各区带的OD值。同时剪一块大小相似无蛋白的透明膜同样处理，做为对照。
计算各区带蛋白含量百分比（以血清为例）
总OD值T＝A α₁ α₂ β γ
白蛋白％=A/T×100％
以此类推。

（三）注意事项
1．醋酸纤维膜孔隙小，含水量少，且较薄，因此它对热很敏感，故应注意控制电压、电流。
2．样品不可过多，只需几微升即可。
3．加样一定要呈直线、垂直、分布均匀，这样泳动的区带整齐、不歪。
4．注意醋酸纤维膜的质量，浸泡很久仍有大块白色硬点者可弃之不用。

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