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琼脂平板电泳

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

琼脂凝胶结构均匀，含水量大，吸附量小，因此电泳速度快，电泳结果区带整齐，分辨率高，易染色，制成薄膜标本保存方便。所以琼脂凝胶电泳最常用。

（一）试剂及材料
1．pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液
2．优质琼脂
3．玻板、打孔器等

（二）操作方法
1．以巴比妥缓冲液配成1%～1.5％琼脂，溶化后制成2mm～3mm的琼脂板。
2．打孔在玻片的1／3处打孔，孔径3mm～6mm。也可用剃须刀片挖一小槽。
3．加样将血清样品直接加入孔内，如非血清样品则尽可能用pH7.4PBS透析后加样。
也可以不打孔，用滤纸片蘸取样品直接插入以小刀划开的琼脂裂缝中。
4．电泳将样品端放入负极，用滤纸（纱布、棉布均可）2～3层搭桥（与玻片同宽度），电压3V/cm～6V/cm，电流强度1.5mA/cm～3mA/cm。
5．断电电泳2h～4h，断电。
6．固定、染色、观察结果。

正常血清经琼脂平板电泳后分成的区带如图2-1：

图2-1 血清经琼脂平板电泳后分成的区带

（三）注意事项
1．为了观察泳动情况，以掌握断电时间，可在加样的同时，加一滴伊文斯兰染色液即可。
2．开始电泳时，电压要小一些，以逐渐升至所需要得强度。
1．为了获得较好的区带结果，采用较小的电压（或电流），适当延长时间是可取的。

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