DNA的凝胶电泳
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DNA的凝胶电泳

点击:   作者:   来源:  时间: 2007-04-09  本站论坛

实验原理
DNA电泳是基因工程中最基本的技术,DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离,重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。根据分离的DNA大小及类型的不同,DNA电泳主要分两类:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳 适合分离1kb以下的片段,最高分辨率可达1bp,也用于分离寡核苷酸,在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化,也称PAGE纯化。
(2)琼脂糖凝胶电泳 可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异,胶浓度为0.5~0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp~50kb。电泳结果用溴化乙锭(EB)染色后可直接在紫外下观察,并且可观察的DNA条带浓度为纳克级,而且整个过程一般1小时即可完成。由于该方法操作的简便和快速,在基因工程中较常用。

琼脂糖凝胶
琼脂糖是从琼脂中分离得到,由1,3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1,4连接的3,6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成,形成相对分子量为104~105的长链。琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布,当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接,形成孔径结构,而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。表2-1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。

表2-1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围

琼脂糖/

标准

高强度

低熔点

低粘度低熔点

0.3

0.5

700bp25kb

0.8

500bp15kb

800bp10kb

800bp10kb

1.0

250bp12kb

400bp8kb

400bp8kb

1.2

150bp6kb

300bp7kb

300bp~7kb

1.5

80bp~4kb

200bp~4kb

200bp~4kb

2.0

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