DNA电泳常见问题分析

问题

原因

解决办法

DNA带模糊

1) DNA降解

避免核酸酶污染

2) 电泳缓冲液陈旧

电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液

3) 所用电泳条件不合适

电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力

4) DNA上样量过多

减少凝胶中DNA上样量

5) DNA样含盐过高

电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐

6) 有蛋白污染

电泳前酚抽提去除蛋白

7) DNA变性

电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

不规则DNA带迁移

1) 对于λ/Hind III片段cos位点复性

电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟

2) 电泳条件不合适

电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液

3) DNA变性

以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热

带弱或无DNA带

1) DNA的上样量不够

增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低

2) DNA降解