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SDS-PAGE的影响因素

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-10-31 　本站论坛

1. 带电颗粒的性质
　　净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多，直径小而且近于球状，则泳动速度快，反之则慢。
2. 电场强度（电位梯度）
　　指单位长度（cm）支持物体上的电位降，它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。根据电场强度可将电泳分为低压（常压）电泳100—500V，电场强度为2—10V/cm，分离时间需要数小时、数天或更长。高压电泳500—1000V，电场强度20—200V/cm，电泳时间短。有时仅需几分钟，主要用于氨基酸、肽、核苷酸。由于电压增高电流增大需要冷却装置。
3. 溶液的PH
　　溶液的pH值决定带电颗粒的解离程度。也决定物质所带净电荷的多少。对氨基酸、蛋白质等两性电解质而言，溶液PH值离等电点越远，颗粒所带净电荷越多，电泳速度越快。反之越慢。血清中：白蛋白pI 4.0；α2球蛋白 pI 5.06；β球蛋白 pI 5.1；γ球蛋白 pI 7.1。在pH 8.6的缓冲液中电泳时，都带负电荷，其泳动速度为：白蛋白>α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白。为了利于分离蛋白质混合液，应选择一种使各种蛋白质所带电荷差异明显的pH值。
4. 溶液的离子强度
　　在保持足够缓冲能力的前提下，离子强度要求最小。溶液离子强度越高，带电颗粒泳动速度越慢，反之越快。通常选择在0.05—0.1mol/L之间。缓冲溶液离子强度可通过下列公式计算：I=0.5ΣcZ2；I — 溶液的离子强度； c — 离子浓度； Z — 离子价数。如:0.154 mol/L的NaCl溶液的离子强度。I=0.5（0.154﹒12+0.154﹒12）=0.154。
5. 电渗作用
　　在有支持物的电泳时影响电泳的另一个重要因素是电渗作用。电渗作用：在电场中，溶液对固体支持物的相对移动。电渗作用根据支持介质的不同而产生不同程度和不同方向的电渗流动。因此电渗作用与电泳速度关系密切。

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