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(二)，Amp-FLP 　　在FVⅢ区内尚有两个VNTP区，一个位于DXS52，另一个为(CA)n位于DX102内，它仍均具有复杂的多者性，亦可用于连锁分析，是引物及扩增产物的多者性见下表

PCR技术在血友病A基因诊断中的应用

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-06-02 　本站论坛

　　血友病A是常见的遗传性凝血障碍，它是由凝血因子Ⅷ的基因缺陷而致其功能异常的致其发病率改为1/1000男性，女性患者极为少见.在临床上，血友病大都有家族史，亦有约20～30%的患者为散发病例，为新生基因突变所致. 一、血友病的遗传学　　本病为X连锁隐性遗传病，其基因定痊于Xq28.因子Ⅷ(FVⅢ)基因全长约为186Kb，包括26个外显子和25个内含子，其mRNA全长约为9Kb，CDNA占为9009bp.其翻译产物为 2351个aa残基的多肽链.在FVⅢ基因内含有多个酶切位点，在其翻译区尚有VNTR序列及(CA/n重复序列. 二、FVⅢ基因突变的特点　　(一)大范围的缺失，重排，重复及括入仅点血友病A的5% 　　(二)FVⅢ基因突变的主要类型为单碱置换所引起的点突变，目前还发现的单碱是置及在八十种以上，几乎涉及FVⅢ的所有外显子和部分内含子. 三、PCR技术在血友病A基因产前诊断中的应用　　FVⅢ基因突变以点突变为主，而且有高度异质性，因此对患者的诊断10前还是主要依据临床表现进行，在一个家系内若要进行血友病A的产前诊断，则必须用连锁分析的方法，该方法的应用则必须满折方法有以下两种: (一).PCR-RFLP 　　在因子组基因内及其复侧有多组RFLP位点可用为标记进行连锁分析进行产前诊断，常用的PCR-RFLP位点有两种，其引物序列，酶切片段多者情况见下表.

位点

引物序列

内切酶

长度

酶解片段

Ext18

5'-TAAAAGCTTAAATGG TCTAGGC-3'

BclⅠ

142

99＋43

5'-TTCGAATTCTGAAATT ATCTTGTTC-3'

Int22

5'-CACGAGCTCTCCATCT GAACATG-3'

XbaⅠ

96.0

68＋28

5'-GGGCTGCAGGGGGGG GGGACAACAG-3'

Int19

5'-GGCGAGCATCTACAT GCTGGGATGAGC-3'

HindⅢ

717

469＋167＋81

5'-GTCCAGAAGCCATTC CCAGGGGAGTCT-3'

位置

引物

片段

范围

DXS52

5'GGCATGTCATCACTTCT CTCATGTT-3'

0.7-3.0

5'CACCACTGCCCTCACG TCACTT-3'

DX102

5'GTAGTCTCAGTCGACA TGCTTTGAC3'

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