细胞培养污染的检验与去除
一、细菌与霉菌的污染
由于环境条件差和操作不当等原因，常可发生细菌和霉菌的污染。常见污染的细菌有革兰阴性菌如：大肠埃希菌、枯草杆菌、假单胞菌等；革兰阳性菌有葡萄球菌等，真菌污染常可发生，尤其炎热、潮湿的季节十分常见，如烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子苗等。霉菌和细菌生长迅速，能在短时间内抑制细胞生长，或产生有意物质杀死细胞。镜下可见脑浆内出现大量颗粒，细胞变圆或崩溃，从瓶壁脱落。霉菌污染容易发现，大
多形成白色或浅黄色菌团漂浮于培养液表面，肉眼可见，有的散在生长，镜下可见丝状菌丝，纵横交错于细胞之间。细菌污染如果较严重时培养基上清混浊，较轻时镜下可见小的菌体在细胞间运动，同时可涂片染色镜检或进行细菌培养基培养，加以确定。抗生素及抗霉菌制剂对预防或排除细菌、霉苗污染均有效。工作中要特别注意和防止所用培养液和血清的污染，日前应仔细检查有无混浊和菌丝存在，以防止在培养细胞时造成污染。
二、支原体污染的检测与去除
（一） 支原体的检测
1． PCR 法
原理 该法是通过PCR 技术将支原体16srRNA 基因特异性扩增，来检测培养细胞中污染的支原体。PCR 引物选自16sr RNA 基因上的支原体特异片段，此片段与其他细菌的序列无交叉性杂交反应。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳，经溴乙啶（EB）染色后在紫外透射仪上进行检测。
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