链霉菌实验操作手册

链霉菌实验操作手册

目录

第一章 培养基 抗生素 生长因子
常用抗生素及其使用浓度
LB（Luria-Bertani）培养基
LA
基本培养基（MM）
R5（1L）链霉菌原生质体转化时用
YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌）
TSBY （1L）（液体培养链霉菌）
MS培养基
2CMY培养基（用于井岗的接合转移）
YMS培养基（阿维，井岗产孢）
YD培养基
生长因子补充物的使用浓度
第二章 DNA基本操作
大肠杆菌质粒的抽提
酶连反应
DNA片段凝胶回收
DNA纯化
E.coil总DNA的提取
链霉菌质粒DNA的小量提取（还需改进）
去磷酸化处理（详见分子克隆实验指南以及Takara的CIAP使用说明）
AT克隆（详见说明书）
Southern Blot
第三章 PCR及相关技术
PCR
PCR重组（详见PCR技术实验指南》p429 重叠延伸技术）
PCR定点诱变（DpnI法）
第四章 基因片段转移技术
大肠杆菌CaCl2法制备感受态细胞及DNA转化
DNA转化
大肠杆菌质粒的快速检测
接合转移（详见英文《手册》249页）
链霉菌原生质体的制备
链霉菌原生质体的转化
PCR-Targeting技术中E.coli电转化感受态的制备及电转化
第五章 RNA操作技术
链霉菌总RNA的抽提
链霉菌的RT-PCR（promega RT kit）
第六章 蛋白质基本操作技术
SDS-PAGE，考马斯亮蓝染色
大肠杆菌可溶性蛋白表达及抽提（用于由IPTG诱导的表达体系）：
链霉菌总蛋白抽提：
大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测（含T7表达系统如BL21菌株中的pET系列表达体系）：
Western Blot
第七章 遗传作图相关技术
链霉菌孢子悬液的制备
链霉菌中NF的证明
孢子杂交
在遗传图谱上两个标记基因之间定位新的基因
第八章 其他技术
链霉菌菌种保藏
检测链霉菌淀粉酶的活性