放射性标记DNA探针的制备
l 聚丙烯酰胺凝胶的制备
1．按照（三）中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小，200bp左右的片段需要4～5％的凝胶，小于100bp的片段应灌制6～8％的凝胶。
l DNA的标记
1．用两种限制性内切酶从10μg质粒上将待测DNA片段切下。注意务必使至少一种酶酶切后产生5’凸出末端。酶切体系终体积50μl，在适宜的酶反应缓冲液条件下反应1小时。
2．向酶切反应混合液中加入
[α－32P]dATP（约10μCi/μl）(若5’凸末端含T残基) 10μl
dCTP(2mmol/L) 1μl
dGTP(2mmol/L) 1μl
dTTP(2mmol/L) 1μl
DNA聚合酶（Klenow片段）（5单位/μl） 1μl
室温温育反应体系30分钟。
[1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
上一篇：与DNA结合蛋白相作用的启动子序列的鉴定 下一篇：RNAi protocol
