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热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

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染色体的提取方法

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-05-28 　本站论坛

1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟，将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中；
2)用1 mlTE(PH8.0)洗沉淀，12000rpm离心10分钟，弃上清；加240μL BufferA和60μL的5M NaCl,每管加Sarkosyl(原浓度是10％)至终浓度为0.1%。
3)于4℃保温1小时；12000rpm离心2分钟，取沉淀。以500μL溶液（由49.99ml BufferA和10μL 1mM Nacl组成）洗2次，重悬细胞于250μL溶液（BufferA 25%蔗糖），室温放置1小时；
5)加50mg/ml溶菌酶至其终浓度为10～20mg/ml。于30℃放置15～30分钟；加500μL BufferB(由10mMTriscl和50mM Na2EDTA组成)，37℃，放置30分钟；
6)加10％的SDS至终浓度为1％，小心混匀，37℃放置1小时；
7)加20mg/ml的蛋白酶K至终浓度为100μL/ml.于37℃保温2小时；
8)用苯酚＋氯仿（1：1）抽提1次，再用氯仿抽提1次；加等体积的异丙醇，可观察到有絮状沉淀；
9)12000rpm离心10分钟，用70％乙醇洗沉淀，12000rpm离心2分钟，弃上清，挥干沉淀，沉淀溶于10～50μL TE(PH8.0)中；
10)用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测染色体提取情况。

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