单链抗体的构建
单链抗体的构建方案
单链抗体的构建分为两个部分：①抗体VH和VL的扩增、克隆和测序；②把经过测序验证的VH和VL基因插入单链抗体表达载体，利用表达载体的性质进行附着型或外分泌型表达。
构建方法如下：
1．抗体VH和VL的扩增、克隆和测序
①寡聚核苷酸的设计和合成
根据Ig可变区基因的序列特点，以及已经发表的基因序列，设计若干套分别对应于不同亚类Ig骨架区序列FR1和FR4的通用引物。为便于克隆和表达，在引物两端引进合适的酶切位点。
②cDNA的提取
利用RTPCR从杂交瘤 细胞株中提取抗体cDNA
③PCR反应扩增VH和VL
④目的基因克隆
VH和VL扩增产物，经琼脂糖凝胶电泳回收，以引物两端的酶进行双酶切；与质粒连接；转入大肠杆菌，培养；选择重组菌落进行双酶切鉴定
⑤目的基因测序
2．单链抗体构建
用连接肽将VH和VL连接，并与质粒相连，筛选，鉴定。
根据需要，转化为不同的表达菌株，进行附着型或分泌型表达。
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