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亚细胞结构分离试剂盒

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-05-28 　本站论坛

亚细胞结构分离试剂盒

GENMED亚细胞结构分离试剂盒产品说明书

主要用途

GENMED亚细胞结构分离试剂是一种旨在通过细胞溶解和差速离心而获得动物细胞核成分和细胞质成分的通用技术方法。其分离的亚细胞结构成分可以被用来进行结构和功能的研究和鉴定。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定。

技术背景

细胞分离成亚细胞结构成分单位是细胞生物学研究的基本手段。采用轻柔的机械物理方法或化学去污剂方法实现细胞溶解，然后运用差速离心的方法将细胞成分分离，由此获得独立的保留其原生化特性的有活力的细胞器和大分子物，从而进行细胞器和亚细胞部位的结构与功能的相关研究，同时检测分子元素的定位、运作和运输。

产品内容

GENMED缓冲液(Reagent A) 1.5毫升
GENMED裂解液(Reagent B) 50毫升
GENMED活性液(Reagent C) 2毫升
GENMED隔离液(Reagent D) 1.5毫升
GENMED胞浆液(Reagent E) 20毫升
产品说明书 1份

保存方式

将GENMED活性保护液(Reagent C)保存在－70℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里

用户自备

GENMED清理液(Reagent F): 清洗组织和细胞表面
GENMED胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液：用于细胞脱离
自选细胞培养液：用户自主实验选用的细胞所需的培养基
15毫升锥形离心管：用于保存细胞浆组分
50毫升锥形离心管：用于细胞收集后离心
台式离心机：一般离心机
超速离心机：分离细胞浆成分
DOUNCE匀浆器：溶解细胞
2毫升离心管：用于亚细胞成分分离操作
超速离心管：分离细胞浆成分
显微镜：用于观察细胞分离组分

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的GENMED活性液(Reagent C)从－70℃的冰箱里取出，置入冰槽里。溶化后，移出微升到微升的GENMED裂解液(Reagent B)里，混匀后，置入冰槽里。然后进行下列操作。

1．准备瓶75cm2细胞培养瓶的细胞，直至细胞生长铺满整个培养表面
2．分别加入毫升GENMED清理液(Reagent F)到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
3．加入毫升GENMED胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面
4．置入37℃培养箱分种
5．轻轻抖动培养瓶，使细胞脱落，然后各加入毫升自备细胞培养液
6．移入一个50毫升锥形离心管
7．放入台式离心机离心分钟，速度为 g
8．小心抽去上清液
9．加入毫升GENMED清理液(Reagent F)，充分混匀细胞颗粒群
10．移出毫升细胞混匀物到2毫升离心管
11．放入台式离心机离心分钟，速度为 g
12．小心抽去2毫升离心管的上清液
13．加入微升GENMED缓冲液(Reagent A)，置入冰槽里――这是未分离的细胞样品
14．将实验步骤10的50毫升锥形离心管放入台式离心机离心分钟，速度为 g
15．小心抽去50毫升锥形离心管的上清液
16．加入毫升含有GENMED活性液(Reagent C)的GENMED裂解液(Reagent B)，充分混匀细胞颗粒群
17．(选择步骤) 加入微升GENMED强化液(Reagent G)，充分混匀细胞颗粒群
18．(选择步骤)放进冰槽里孵育分钟
19．即刻放入DOUNCE匀浆器，用研磨棒匀化细胞
20．置于冰槽里孵育分钟
21．将所有细胞匀浆物移入2毫升离心管（P1），放入台式离心机离心XX分钟，速度为 g
22．小心移出上清液到另一个2毫升离心管（S1）
23．加入微升GENMED裂解液(Reagent B)到P1离心管，充分混匀
24．放入DOUNCE匀浆器匀化次
25．置于冰槽里孵育分钟
26．将所有匀浆物移入新的2毫升离心管（P2），放入台式离心机离心分钟，速度为 g
27．小心移出P2上清液到S1离心管
28．加入毫升GENMED裂解液(Reagent B)到P2离心管，充分混匀
29．同时将S1和P2管放入台式离心机离心分钟，速度为 g
30．分别小心移出S1和P2管上清液到超速离心管，在液面顶部加上毫米以内的GENMED隔离液(Reagent D)
31．放入超速离心机离心小时，速度为 g
32．加入微升GENMED 缓冲液(Reagent A)到P2管，充分混匀——这是细胞核成分，其中包含细胞核和细胞骨架集聚物
33．小心移出毫升超速离心管里的上清液到15毫升锥形离心管
34．加入毫升GENMED胞浆液(Reagent E)到15毫升锥形离心管，充分混匀——这是细胞浆成分
35．将上述3种组分放入－70℃冰箱里

注意事项

1．所有操作均须在4℃状态下进行。
2．细胞核组分可以被用来进行电泳迁移率变动分析实验去研究转录因子或活体外转录反应
3．对于易脆裂的细胞核或难以溶解的细胞，采用化学处理法GENMED强化液(Reagent G)加上物理匀浆法是优先推荐的技术处理

质量标准

1．本产品经鉴定性能长期稳定
2．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
3．本产品经鉴定亚细胞结构分离可靠，成分独立，维持正常活性

使用承诺

我们秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号名称规格
GMS10005 GENMED亚细胞结构分离试剂盒 10次
GMS10005A GENMED缓冲液(Reagent A) 5毫升
GMS10005B GENMED裂解液(Reagent B) 50毫升
GMS10005C GENMED活性液(Reagent C) 2毫升
GMS10005D GENMED隔离液(Reagent D) 5毫升
GMS10005E GENMED胞浆液(Reagent E) 20毫升
GMS10005F GENMED清理液(Reagent F) 500毫升
GMS10005G GENMED强化液(Reagent G) 1毫升
GMS12024 GENMED胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液 100毫升

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