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核酸定量分析方法

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-05-28 　本站论坛

核酸定量分析 DNA 或 RNA(以260nm处的吸光值为基础)
1. 制备用蒸馏水稀释过的DNA 或 RNA 样品溶液 ( 典型稀释比为 1:100 或 5:500μl)
2. 使用紫外光源,在260 nm 处测定吸光值,也可以在280 nm 和230 nm 测定吸光值 (260/280 的光吸收值比粗略为2/1；260/230的光吸收值比也应接近 2/1)
3. 计算原液浓度: A260 x 转化系数 x 稀释率 = DNA 原始浓度 (μg/ml)光吸收值单位
双链 DNA 的转化系数是 50μg/ml；单链 DNA 和 RNA 的转化系数是 40μg/ml
平均的脱氧核苷酸(碱基) 分子量是 326.95，因此，平均的碱基对的分子量是753.9。为便于计算，这个值的单位可以用微摩尔，比如下面的例子:
(2 x μg DNA) [753.9 x(双链DNA的碱基对数)] 因此，1 μg的 pUC DNA就等于 2 x 1 μg [753.9 μg/ μmol bp x 2676 bp] 或 2 μg 2017436.4 μg/ μmol = 1 x 10-6 μ摩尔

寡核苷酸
1. 寡核苷酸的消光系数(∈)的计算:
a. 将碱基A、C、G 和 T 的出现次数用表格统计出来
b. 乘以如下数值:
A的次数 x 15.4 ml/

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