家畜传染病学实验指导
家畜传染病学实验须知
家畜传染病往往借助人类的活动而传播，有些是人兽共患传染病，如炭疽、布氏杆菌 病、结核、狂犬病等。因为在家畜传染病学实验的对象和材料，与病畜和病原微生物有关， 所以学生在操作过程中稍有疏忽，就有可能引起疫病流行，甚至感染人身，危及生命，于是实验时必须遵守下列规定。
1．在实验时必须穿工作服，当接触或操作危险材料时，须穿戴胶靴、围裙、手套及眼镜，用后应立即消毒清洗后，方可再用。在操作时，一定严肃认真，勿以手指或其他器物等接触口唇、眼、鼻和面部，手和面部有伤口时，应避免危险材料的接触。
2．使用危险材料应行无菌操作，盛危险材料的器皿要牢固，以免操作过程破裂，以防液体流出，造成污染。用过的尸体、内脏、血液以及废弃的培养基、生物制品等，须严加，消毒或深埋。用过的棉球、纱布等污物，放在固定容器中，统一处理，不得随意抛弃。万一危险材料滴出或打翻，或发生其他意外，应立即报告指导老师及时处理。如手指或皮肤受污染，立即将手浸入消毒液中15min，然后用清水洗干净。
3．实验完毕，将操作台面用消毒液消毒一下，自身的手也须消毒和洗刷干净后方得离开实验室。
4．实验前应对本次实验目的、有关内容和操作技术进行预习；实验时在老师指导下进行，并遵守实验程序，均不可潦草应付或不动手；实验时应作好记录，特别是实验内存、方法及结果应详细记录，认真做好作业。
5．爱惜药械和仪器，特别对精密仪器一定要按照教师指导的方法和步骤进行操作，不可粗心大意，以免发生损坏。
实验一 家畜传染病的临诊记录和表报
目 的
1．认识传染病临诊记录和表报工作的意义。
2．熟悉家畜传染病的主要表格及其使用方法。
内容及方法
一、 传染病临诊记录和表报工作的实际意义
有关家畜传染病防治工作的部门，应建立制度，坚持作好临诊记录和表报工作。临诊记录和表报做得好坏，反映有关兽医机构和人员的业务水平和工作质量。没有详细的临诊记录，就无从进行全面的统计和对疾病的正确分析，因而也就不可能拟定出有预见性的防疫计划和有效的家畜保健措施。
二、 有关家畜传染病的主要表格
1．家畜卫生卡片 畜牧场、农场和机关单位的养畜场，均应建立家畜卡片制度，进行家畜健康史的登记。每头或每群家畜填写卫生卡片一张，由有关的兽医人员或兽医机构统一管理。格式见表1。卡片编号最好和畜号统一起来，即括号内标明畜别，后面填畜号。健康史栏着重写下列内容：原产地家畜传染病流行情况简介；其亲代何时患过何种传染病；该家畜在入场或建立卡片以前何时患过何种疾病或接受过何种预防注射及检疫。
2．家畜传染病防疫措施登记表 也可称为免疫接种和检疫登记簿。各农牧场、兽医诊
疗部门和各级兽医防治机构均可使用。格式如表2。
3．疫情登记表 供各级兽疫防治机构作为地区的基本流行病学统计资料。格式如表3。
4．畜禽检疫(验)证明 畜禽及畜禽产品在长途运输时，在启运前须经有关兽医单位进行必要的检疫(验)，并经预防接种或消毒后签发检疫(验)证明；检疫(验)证明有：畜禽产地检疫证明、畜禽产品检疫(验)证明、畜禽及畜禽产品运载工具消毒证明和畜禽运输检疫证明，检疫(验)证明的格式由农业部监制。检疫(验)证明一式2～3联，第一联存根，第二联交畜(货)主，第三联同货随行，格式如表4—I、4—Ⅱ、4—Ⅱ。运输时应遵守的特殊要求，如需用不漏水的车船、沿指定路线，在限定日期内运达指定地点和中途不得停留等限制，可在备注栏内详细注明。
5．其他 在兽疫防治、诊断检验和有关的研究工作实践中，还需要其他一些记录表和报表，如家畜传染病病历、家畜传染病门诊病畜登记簿、家畜传染病住院病畜登记簿、兽医诊断室诊断记录表等，这些表报与一般兽医诊疗部门所用的基本相同。
复习题与作业
1．试述临诊记录和表报工作的实际意义。
2．试将附发的四种表格各填写一份。
实验二 消 毒
目 的
1．结合生产实践掌握畜禽舍、土壤、粪便等消毒方法。
2．检查消毒质量的方法。
内容及方法
一、消毒的器械和消毒剂
1．喷雾器 用于喷洒消毒的器具称为喷雾器，与吸入或压力唧筒相似。喷雾器有两种，
一种是手动喷雾器，另一种是机动喷雾器。前者有背携式和手压式两种(图1—Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ)，常用于小量消毒；后者有背携式和担架式两种(图1—Ⅳ、Ⅴ)，常用于大面积消毒。
消毒液在装入喷雾器之前，应先充分溶解过滤，以免可能存在的残渣堵塞喷雾器的 喷嘴。
2．火焰喷灯 是利用汽油或煤油作为燃料的一种工业用喷灯，常用以消毒被病原体污染了的各种金属制品，如鼠笼、兔笼、鸡笼等。
3．化学消毒剂 消毒剂是防疫工作中的重要武器之一，是消灭被传染原污染在外界环境中的病原微生物，可切断传播途径，预防传染病的发生和蔓延。近年来，我国集约化养殖业发展很快，而消毒剂日益受到重视。化学消毒剂品种较多，现介绍几种常用消毒剂。
(1)二氯异氰尿酸钠(优氯净)Sodium dichloroisocyanurata 含有效氯60％左右，易溶
于水，杀菌谱广，对细菌、病毒、真菌及细菌芽胞有较强的杀灭作用。用具的消毒(0.5％～10％，15～60min)；地面的消毒(5％~10％，350～1000ml／m2，1～3h)。同类产品三氯异氰尿酸(Trichloroisocynccric acid)含有效氯90％，溶解度低..
(2)农福New Formula Farm Fluid 醋酸、混合酚与烷基苯磺酸复配的水溶液，易溶于水。对细菌和病毒有杀灭作用。1％～1.3％溶液用于畜禽喷洒消毒，1.7％溶液用器具和车辆消毒。相近产品毒菌净(复合酚)，易溶于水，0.33％溶液用于细菌性传染病的畜舍、用具消毒；1％溶液用于病毒性传染病的畜舍、笼具消毒。
(3)百毒杀Deciquam222，Bromo-sept50新型季铵盐类消毒剂，属阳离子型表面活性剂，水溶性低，对马立克氏病病毒、新城疫病毒有较强灭活，对芽胞和IBDV效力差。环境消毒时取本晶lml加入3L水中。饮水消毒时，取lml加入10～20L水中。
(4)碘伏Iodophors 碘与表面活性剂的不定型结合物，在溶液中逐渐释放碘，对细菌、病毒、真菌和细菌芽胞有杀灭作用，杀菌浓度为5—10mg／L。
(5)过氧乙酸 灭菌谱广，对细菌、病毒、真菌和芽胞有较强灭菌作用。0.5％溶液用于喷洒畜、禽舍、地面和食槽。70℃以上易引起爆炸。
(6)漂白粉 为次氯酸钙，是一种广泛应用的消毒剂，杀菌效力强。10％～20％乳剂用于畜、禽舍、环境的消毒，在5～log／m3水中，可作饮水消毒。
(7)福尔马林 为38％～40％甲醛的水溶液，有较强杀菌作用。主要用于熏蒸消毒，用量为250ml／m3空间。还有固体福尔马林，置容器上加热熏蒸消毒。
二、畜、禽舍的消毒
畜、禽舍的消毒分两个步骤进行，第一步先进行机械清扫，第二步是化学消毒液消毒。
机械清扫是搞好畜、禽舍环境卫生最基本的一种方法。据试验，采用清扫方法，可以使鸡舍内的细菌数减少21.5％，如果清扫后再用清水冲洗，则鸡舍内细菌数即可减少54％～60％；清扫；冲洗后再用药物喷雾消毒，鸡舍内的细菌数即可减少90％。
用化学消毒液消毒时，消毒液的用量一般是以畜、禽舍内每平方米面积用1L药液。消毒时，先喷洒地面，然后墙壁，先由离门远处开始，喷完墙壁后再喷天花板，最后再开门窗通风，用清水刷洗饲槽，将消毒药味除去。在进行声、禽舍消毒时也应将附近场院以及病畜、禽污染的地方和物品同时进行消毒。
1．畜、禽舍的预防消毒 在一般情况下，每年可进行两次(春秋各一次)。在进行畜、禽舍预防消毒的同时，凡是家畜(禽)停留过的处所都需进行消毒。在采取“全进全出”管理方法的机械化养畜(禽)场，应在全出后进行消毒。产房的消毒，在产仔前应进行一次，产仔高峰时进行多次，产仔结束后再进行一次。
畜、禽舍预防消毒时常用的液体消毒剂有10％～20％的石灰乳和5％～10％的漂白粉溶液。
畜、禽舍预防消毒也可用气体消毒。所用药品是福尔马林和高锰酸钾。方法是按照畜、禽舍面积计算所需用的药品量。一般每立方米空间，用福尔马林25ml，水12.5ml，高锰酸钾25g(或以生石灰代替)。计算好用量以后将水与福尔马林混合。畜、禽舍的室温不应低于正常的室温(15～18℃)。将畜、禽舍内的管理用具、工作服等适当地打开，箱子与柜橱的门都开放。再在畜、禽舍内放置几个金屑容器，然后把福尔马林与水的混合液倒人容器内，将牲畜迁出，畜、禽舍门窗紧闭，其后将高锰酸钾倒人，用木棒搅拌，经几秒钟即见有浅蓝色刺激眼鼻的气体蒸发出来，此时应迅速离开畜、禽舍，将门关闭。经过12～24h后方可将门窗打开通风。倘若急需使用畜、禽舍，则需用氨蒸气来中和甲醛气。按畜、禽舍每l00m3取500g氯化铵，lkg生石灰及750ml的水(加热到75℃)。将此混合液装于小桶内放人畜、禽舍。或者用氨水来代替，即按每l00m3畜、，禽舍用25％氨水1250ml，中和20～30min后，打开畜、禽舍门窗通风20~30min，此后即可饲养畜、禽。
在集约化饲养场，为了预防传染病平时可用消毒剂进行“带畜消毒”。如用0.3％过氧乙酸对鸡舍进行气雾消毒，对鸡舍地面、墙壁、鸡被羽表面上常在菌和肠道菌有较强的杀灭作用。如0.3％过氧乙酸按30ml／m3剂量喷雾消毒，对鸡群和产蛋鸡均无不良影响。“带畜消毒”法在疫病流行时，可作为综合防制措施之一，及时进行消毒对扑灭疫病起到一定作用。0.5％以下浓度的过氧乙酸对人畜无害，为了减少对工作人员的刺激，在消毒时可配戴口罩。
2．畜、禽舍的临时消毒和终末消毒 发生各种传染病而进行临时消毒及终末消毒时，用来消毒的消毒剂随疫病的种类不同而异，一般肠道菌、病毒性疾病可选用上述所介绍的几种消毒剂，如5％漂白粉乳剂，1％～2％氢氧化钠热溶液。但如发生细菌芽胞引起的传染病(如炭疽、气肿疽等)时，则需使用10％～20％漂白粉乳剂、10％～20％氢氧化钠热溶液或其他强力消毒剂。在消毒畜、禽舍的同时，在病畜、禽舍、隔离舍的出入口处应放置，设有消毒液的麻袋片或草垫。
三、地面土壤的消毒
被病畜(禽)的排泄物和分泌物污染的地面土壤，可用5％～10％漂白粉溶液、百毒杀或10％氢氧化钠溶液消毒。停放过芽胞菌所致传染病(如炭疽、气肿疽等)病畜尸体的场所，或者是此种病畜倒毙的地方，应严格加以消毒，首先用10％～20％漂白粉乳剂或5％~10％优氯净喷洒地面，然后将表层土壤掘起30cm左右，撤上千漂白粉并与土混合，将此表土运出掩埋。在运输时应用不漏土的车以免沿途漏撒，如无条件将表土运出，则应多加干漂白粉的用量(1m2面积加漂白粉5kg)，将漂白粉与土混合，加水湿润后原地压平。
四、粪便的消毒
传染病病畜、禽粪便的消毒有多种方法，如焚烧法、化学药品消毒法、掩埋法和生物热消毒法等。实践中最常用的是生物热消毒法，此法能使非芽胞病原微生物污染的粪便变为无害，且不丧失肥料的应用价值。
粪便的生物热消毒法通常有两种，一种为发酵池法，另一种为堆粪法。
1．发酵池法 此法适用于饲养大量家畜的农牧场，多用于稀薄粪便(如牛、猪粪)的发酵。其设备为距农牧场200～250m以外无居民、河流、水井的地方挖筑两个或两个以上的发群池(池的数量与大小决定于每天运出的粪便数量)。池的边缘与池底用砖砌后再抹以水泥，使不透水。待倒人池内的粪便快满时，在粪便表面铺一层干草，上面盖一层泥土封严，经1～3个月即可掏出作肥料用。几个发酵池可依次轮换使用。
2．堆粪法 此法适用于干固粪便(如马、羊、鸡粪等)的处理。在距农牧场100～200m
以外韵地方设一堆粪场。堆粪的方法如下：在地面挖一浅沟，深约20cm，宽约1．5～2m，长度不限，随粪便多少而定。先将非传染性的粪便或蒿秆等堆至25cm厚，其上堆放欲消毒的粪便、垫草等，高达1～1．5m，然后在粪堆外面再铺上l0cm厚的非传染性的粪便或谷香草，并覆盖l0cm厚的沙子或泥土。如此堆放3个星期到3个月，即可用以肥田。
当粪便较稀时，应加些杂草，太干时倒人稀粪或加水，以促其迅速发酵。处理牛粪时， 因牛粪较稀不易发酵，可以掺马粪或干草，其比例为4份牛粪加1份马粪或干草。
五、污水的消毒
被原体污染的污水，可用沉淀法、过滤法、化学药品处理法等进行消毒。比较实用
的是化学药品处理法。方法是先将污水处理池的出水管用一木闸门关闭，将污水引^6水池后，加入化学药品(如漂白粉或生石灰)进行消毒。消毒药的用量视污水量而定(一般
1L污水用2～5g漂白粉)。消毒后，将闸门打开，使污水流人渗井或下水道。
六、皮革原料和羊毛的消毒
皮革原料和羊毛的消毒，通常是用福尔马林气体在密闭室中蒸熏，但此法可损坏皮毛品质，且穿透力低，较深层的物品难于达到消毒的目的。目前广泛利用环争乙烷气体来进行消毒。此法对细菌、病毒、立克次氏体及霉菌均有良好的消毒作用，对皮毛等畜产品中的炭疽杆菌芽胞也有较好的消毒效果。消毒时必须在密闭的专用消毒室或密闭良好的容器(常用聚乙烯或聚氯乙烯薄膜制成的蓬布)内进行。环氧乙烷的用量，如消毒病原体繁殖型，每立方米用300～400g，作用8h；如消毒芽胞和霉菌，每立方米用700～950g左右，作用24h。环氧乙烷的消毒效果与湿度、温度等因素有关，一般认为，相对湿度为30％～50％，温度在18℃以上，38～54℃以下，最为适宜。环氧乙烷的沸点为10．7℃，沸点m766温度为易挥发的液体，遇明火易燃易爆，对人有中等毒性，应避免接触其液体和吸入其气体。
七、消毒质量的检查
为了验证消毒的效果，可对消毒对象进行细菌学检查。方法是在消毒以后由地面(在
畜、禽舍的家畜后脚停留的地方)、墙壁上、畜、禽舍墙角以及饲槽上取样品，用小解剖月在上述各部位划出大小为10cmX10cm的正方形数块，每个正方形都用灭菌的湿棉签(干棉签的重量为o．25～o．33g)擦拭1～2min，将棉签置于中和剂(30m1)中并沾上中和剂然后压出、沾上、压出，如此进行数次之后，再放人中和剂内5～l0min，用镊子将棉签拧干，然后把它移人装有灭菌水(30ml)的罐内。
当以漂白粉作为消毒剂时，可应用30ml的次亚硫酸盐中和之；碱性溶液用0．01％醋酸30ml中和；福尔马林用氢氧化铵(1％～2％)作为中和剂。当以克辽林、来苏儿及其他药剂消毒时，没有适当的中和剂，而是在灭菌的水中洗涤2次，时间为5~l0min，依次地把棉签从一个罐内移人另一个罐内。
送到实验室去的灭菌水里的样品在当天把棉签拧干和将液体搅拌之后，将此洗液的样品接种在远藤氏培养基上。为此，用灭菌的刻度吸管由小罐内吸取0．3ml的材料倾人琼脂．平皿表面，用巴氏吸管作成的“刮”，在琼脂平皿表面涂布，然后仍用此“刮”涂布第二个琼脂平皿表面。将接种了的平皿置于37℃温箱内，24h检查初步结果，48h后检查最后结果。如在远藤氏培养基上发现可疑菌落时，即用常规方法鉴别这些菌落。如无肠道杆菌培养物存在时，证明所进行的消毒质量是良好的，有肠道杆菌生长，说明消毒质量不良。
复习题与作业
1．试述消毒的种类和意义。
2．分别列举适用于杀灭芽胞菌、非芽胞菌和病毒的化学消毒药。
3．粪便生物热消毒的原理为何?
4．如何进行畜、禽舍消毒质量的微生物学检查?
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