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电子显微镜的使用与细胞超微结构观察

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-05-30 　本站论坛

电子显微镜的使用与细胞超微结构观察

一、实验目的
（1）了解透射电子显微镜的主要结构、功能与基本工作原理；
（2）了解扫描电子显微镜的主要结构、性能与基本工作原理。

二、实验步骤（讲解演示）
1）透射电镜样品超薄切片常规制作规程
1．取材：根据实验目的取材，要求部位准确，体积小于2mm3
2．醛类固定：用2%-3%的戊二醛固定2小时；
3．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min；
4．锇酸固定：用1%-2%的锇酸固定2~3小时；
5．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10 min；
6．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min，再用100%乙醇脱水3次，每次30min；
7．置换：用环氧丙烷或丙酮置换3次，每次30min;
8.浸渍：10hr以上，浸渍过程如下：
①丙酮：包埋剂=3：1的浸渍液浸渍（动物样品1hr，植物样品2~3hr）；
②丙酮：包埋剂=1：1的浸渍液浸渍（动物样品1hr，植物样品2~3hr）；
③丙酮：包埋剂=1：3的浸渍液浸渍（动物样品4hr，植物样品12~24hr）；
④纯包埋剂浸渍（动物样品4hr，植物样品12~24hr）；
9．包埋：将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中；
包埋剂配方中Epon812，MNA，DDSA，DMP-30的比例见附表
10．聚合：将包埋板置于40C、60℃条件下各聚合48hr；
11．修块：将包埋头修成梯形，且样品表面积小于0.2mm×0.2mm
12．超薄切片：切片厚度50-90nm
13．染色：铀染色 5~15min 清洗
铅染色 5~10min 清洗
2）扫描电镜样品常规制备规程
1．取材：根据实验目的取材，要求部位准确
2．清洗：用磷酸缓冲液反复清洗样品表面的灰尘、杂质等附着物
3．固定：用2%-3%的戊二醛固定2小时
4．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10 min
5．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min，再用100%乙醇脱水3次，每次30min；
6．置换：用叔丁醇置换3次，每次30min
7．干燥：用冷冻干燥仪干燥样品
8．粘样：用双面胶带将样品粘到样品台上
9．镀膜：用离子溅射仪给样品镀10nm金膜

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