蛋白质印迹(Western blotting)方法原理和优化 抽滤 抽滤是一种直接将蛋白质转移到膜上的方法。利用真空使溶解的样品滤过膜,蛋白质吸附到膜上,同时样品中其它成分被真空抽走。另外,也可直接将样品点在膜表面使之干燥。随后可对固定在膜上的蛋白质进行分析。 点印记
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  • 点击:    作者:51protocol收集   来源: 日期:2007-05-30    本站论坛

蛋白质印迹(Western blotting)方法原理和优化

抽滤
抽滤是一种直接将蛋白质转移到膜上的方法。利用真空使溶解的样品滤过膜,蛋白质吸附到膜上,同时样品中其它成分被真空抽走。另外,也可直接将样品点在膜表面使之干燥。随后可对固定在膜上的蛋白质进行分析。
点印记和狭缝印记是抽滤方法的两种变型,用多支管装置将样品加到膜上成点状或狭缝图样。这些方法可用于快速定性筛选大量样品或定量分析类似样品,尤其是测试复杂分析中实验参数的适用性。
另一种抽滤方法的变型是格栅免疫印迹,这种方法适用于高度平行的样品分析,当样品量及其优先并且不能用常规方法如ELISA进行分析时使用。格栅免疫印迹可用于表征变态反应原-特异性抗体应答,只需最小量的病人血清。
当准备抽滤印迹膜时,要考虑以下方面:

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