反相HPLC法测定天麻中药材中天麻素的含量
反相HPLC法测定天麻中药材中天麻素的含量
天麻(Gastrodia elata BL)，系兰科寄生草本植
物，药用其地下根茎，主治诸风湿痹、风湿眩晕、头
痛等症，具有明显的镇静、抗惊厥、抗炎镇痛，抗衰
老，能改善学习记忆，具有很强的免疫功能。20世
纪70年代以来，天麻人工栽培的研究迅速发展。
《中国药典》中以天麻中的天麻素含量评价天麻的
药材质量，其含量测定方法为HPLC法_l J，但实测
中部分组分峰与天麻素峰分离不完全，尚存在溶
解样品的溶剂与流动相不相配导致天麻素峰分岔
的问题_2 J。为此我们进行了研究，筛选出最佳色
谱条件，用于测定中药材中天麻素的含量，结果令
人满足。另外，在研究过程中首次发现在天麻素
对照品中存在1个未知组分，而药典方法无法分
离出此未知组分。在本实验建立的色谱条件下，
证实野生及家种的天麻中药材中都存在着该未知
组分，还发现在合成天麻素原料及其制剂中也存
在此未知组分_2 ；其结构及药理功效正在进一步
研究中
1 试验部分
1．1 仪器与试剂
Et本岛津 6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫
外可见光检测器，CR3A色谱数据处理仪； I型粉
碎机，江苏丰县分析仪器厂；CSX一50超声仪。
天麻素对照品由中国药品生物制品检定所提
供；市售天麻中药材，野生、家种：合成天麻素原料
由昆明制药股份有限公司提供；；乙睛：HPLC级；
二次亚沸水。
1．2 色谱操作条件
色谱柱： 迪马公司钻石柱(250 mm ×
O4．6 mm，5／zm)；
流动相： (乙腈)：V(H2O)=10：90；
AUFS：0．16，流速1．0 mL／min，
检测器：波长：270 nm；
进样量：10 L，柱温=40℃ ，纸速3 mm／min；
天麻素保留时间6．96 rain：未知物保留时间
l5 06 rain，对照品、样品色谱图见图1。
%26#8226; 24 %26#8226;
一一一
b
． ．． ．
(1)天麻素对照品
b
(2)野生天麻药材 (3)人工栽培天麻药材
a—— 天麻素 b—— 未知成分
图1 标准品和样品色谱图
1．3 对照品溶液配制
精确称取80℃下干燥1 h的天麻素对照品适
量，用流动相作溶剂，配成1．4 g／L的溶液，摇匀。
精确量取上述溶液5 mL置于1个25 mL的容量
瓶中，用流动相稀释至刻度，配成0．28 g／L的对
照液。
1．4 样品的制备
用XA—I型粉碎机将各药材磨成0．216 mm
粉末；分别取各种天麻粉末1．25 g，精确称定，用
甲醇溶解在25mL的容量瓶中，超声处理30 min；
静置24 h，再超声处理30 min，定容，静置后，各精
确量取上清液5mL置于瓷舟中，在水浴上蒸于，
用流动相定量转移到5 mL的容量瓶中，定容，摇
匀，静置后取上清液过0．45 m滤膜，进样测定。
2 结果
2．1 色谱柱、流动相和样品溶剂的选择
2．1．1 色谱柱的选择
采用Shim—pack ODS柱，CLC—CR柱，Lick—
RPC C】8柱，CLC—CN柱等进行试验，从峰形、分离
度及色谱分析时间等考察，Diamonsil钻石C】8柱
较理想。
2．1．2 流动相的选择
本试验曾用甲醇、乙腈、四氢呋喃、磷酸盐缓
冲液、纯水等各比例混合溶剂进行试验，结果表
明，选用V(乙腈)：V(H2O)=10：90作流动相最
佳，分离度好，分析时间适中
2．1．3 样品溶剂的选择
用甲醇、乙腈、H o不同比例混合溶液配制
样品，结果表明：选用流动相作为溶剂较为理想，
解决了天麻素峰分岔的问题。
2．2 系统适用性试验
精确称取天麻素对照品适量，用流动相溶解、
定容。取其10 L进样，在本试验色谱条件下，色
谱图见图1，保留时间为：天麻素6．96 min；未知
组分15．05 min。天麻素的理论塔板数为：2973，
拖尾因子为I。天麻素样品中天麻素与其最相邻
组分峰的分离度为2．24。
2．3 质量浓度线性范围和最低检测限
精确称取天麻素对照品1．24、3．75、7．60、
9．89、15．20、20．10mg，分别置于6个25mL的量
瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。依本文方法进
行测定，得到质量浓度C(g／L)与峰面积A 的线
性方程为：
A = 9891．4C +0．1751，丫=0．9999
天麻素对照品进样量在0．05～0．8g／L内，
线性关系良好。在本文液相色谱分离条件下，当
信噪比(S )为3：1时，天麻素的最低检测限为4
g／______L。
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