冷冻切片的方法是一种最省时最快速的制片方法。因此主要用于临床手术中的病理诊断上。其原理很简单：冷冻使组织变硬，以代替石蜡做浸蜡。组织中的水分起着浸 蜡的作用，用OCT做包埋剂，将组织固定在冷冻头上，在短时间内冻好，可以立即在冷冻机上进行切片，不需要经过脱蜡，可随时染色，节省了时间。另外，在冷 冻切片的过程中，没有一个步骤使组织接触到任何有机溶剂或其他试剂能溶解或破坏组织中的脂肪、酶以及抗体。因此，冷冻切片也常用于：①显示组织中的脂质和 中性脂肪；②显示酶的活性；③神经组织的染色；④免疫荧光技术。
冷冻切片种类很多，以前有氯乙烷法、二氧化碳法、半导体冷冻法等。这些方法在使用 过程中都存在着一定的难度和不方便，制做出的切片质量也不好，直接影响到诊断。随着医学技术的发展，以上方法已淘汰，现在使用的冷冻切片机（恒冷切片 机），从根本上解决了不利于切片的难题。能更快、更方便地切出较好的切片，而且人为的缺陷也少。
冷冻切片目前最广泛应用于临床手术中的病理诊断，手术医生根据病理诊断结果决定手术范围，因此做出一些高质量的冷冻切片至关重要。
冷冻切片操作程序：1.冷冻切片机要始终处于运行状态，即使在不做冷冻切片时也要开着致冷，不能时开时关，以免影响机器寿命。
2.手术取下的新鲜组织不要固定，因固定过的组织不利于切片，而且还会影响染色。
3. 用OCT做包埋剂，起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上，OCT不要太多，以免流到固定头外，组织表面露在OCT外。
4. 外固定头放在冷冻机内的速冷台上，在-25℃左右，冻10min，视组织不同而时间略有差异，组织较大或脂肪组织时间可长一些，一般情况下10min左右即 可。如果冷冻不足，则切片可呈粥糜状或切不下来；如果冷冻过分，则切片呈碎悄状或切片上呈条痕状，都得不到良好的切片。
5.高速刀的角度，固定好，切片刀要快。
6. 把冻好的冻头夹到切片机上，用精调修平组织，使其暴露最大切面，将微调刻度调在5μm，放下抗卷板开始切片，得到满意切片后，打开抗卷板，将组织贴在载玻片上。载玻片要放平。动作要稳，一次完成，这样才能将切片完整的贴在载玻片上。
7.切片晾干后用95％乙醇固定10s，水洗后进行常规染色。
8.冷冻切片完成后取下冻头组织，固定后做常规切片。将冷冻机内的组织碎屑清扫干净，定期打开紫外线消毒。
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