醋酸因使胶原纤维肿胀,故不能单独使用;但在混合固定液中有抗其它试剂使细胞皱缩的作用。因此,醋酸常同酒精配制成为混合固定液来抵消经过固定所引起组织的高度收缩和硬化的作用。
醋酸可与水,酒精等溶剂相混合。一般使用浓度为0.3~5%,以5%为备用液。用醋酸固定后的组织不必水洗,即可直接投入50%或70%酒精之中。醋酸的渗透性很强,一般较小的组织块只须1小时即可。
醋酸可使核蛋白沉淀,因此染色质固定很快,是染色质良好的固定液。对蛋白质具有保存作用,对脂类、糖不产生影响,高浓度醋酸则可溶解脂肪及类脂,并使线粒体和高尔基体被破坏或变形。所以,一般配制含醋酸的混合液时,其浓度都不超过5%。
苦味酸(C6H2(NO2)3OH)
苦味酸是一种具毒性的黄色结晶体,味苦,在空气中干燥时有爆炸性,故需保湿保存,最好是储存在一层水下。一般情况下,制片室将苦味酸制成饱和溶液作为常备用液,通常固定的浓度是饱和液,其饱和度为0.9%~1.2%。苦味酸溶于酒精,二甲苯,固定后的组织经酒精脱水即可。苦味酸也是一种良好的组织染色剂,经苦味酸固定剂固定的组织作三色染色可使颜色对比鲜艳。
苦味酸能沉淀一切蛋白质,并与其结合形成苦味酸盐,遇水时,其中有的部分可溶与水,因此在一般情况下,组织经苦味酸或含有苦味酸的固定剂固定后,这种水溶性苦味酸盐在与水接触前需先经酒精处理使其呈不溶性,可以70%酒精浸洗,在酒精内加上少量碳酸锂或氨水即可被洗去。或者是不经水洗,直接投入70%酒精脱水。在脱水过程中,苦味酸可被各级酒精溶解洗去。即使不能全部洗去,亦不妨碍染色,脱水酒精虽被染黄,但亦不失其脱水效果。
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