组织里存有钙盐可妨碍用常规方法制作良好切片。骨组织及钙化病灶，经过固定后，必先将钙盐除去使组织软化，才能进行常规切片。如脱钙不全则切片易撕开或碎裂并损伤切片刀刃。脱去钙盐的过程――称为脱钙。脱钙时应注意：
1.骨组织固定24小时后，锯下不超过0.5mm厚的薄骨片，再以10%福尔马林固定后进行脱钙。（未固定的组织在酸性脱钙液中受到的损伤比已固定的组织约大三倍）。骨组织过厚则需延长脱钙时间，长时间浸于强酸影响切片染色效果。
2.在不影响诊断的条件下，应将骨组织周围的软组织全部剥去。如果切片目的在于观察骨髓病变或骨组织肿瘤，最好除去一部分正常的致密的骨组织，以利于脱钙和制片。
3.脱钙前最好先将骨组织进行脱脂。
4.脱钙要彻底，脱水应充分，在脱水过程中，要注意不使其过度硬化。
脱钙剂
优质脱钙剂的标准是：
（a） 完全脱钙。
（b） 不损伤组织细胞或纤维。
（c） 不妨碍以后的染色技术。
（d） 适当的脱钙速度。
一、强酸脱钙剂
1.含甲酸脱钙液
Gooding和Stewart氏液（甲酸－福尔马林液）
配方：甲酸 5－25ml
福尔马林 5ml
蒸馏水 加至 100ml
5%的甲酸是一种良好的常规脱钙剂，速度适当，组织损害小。当甲酸成分增至25%则增快脱钙速度，加入甲醛可适当保护组织不受酸损害，但应切记，增加脱钙速度只能靠牺牲细胞微细构造来获得。
根据组织的厚度和钙化程度，在5％甲酸液内2－4天可完全脱钙，横切的肋骨需36－48小时。
2.含盐酸脱钙液
Von Ebner氏液
配方：浓盐酸 15ml
氯化钠 7.5ml
蒸馏水 加至 100ml
盐酸脱钙易使组织收缩，作用速度较快，用氯化钠作为溶剂则效果良好，牙齿脱钙时盐酸可增至10－20%。脱钙时，每日应加盐酸（0.5%）直至完成脱钙，横切的人肋骨（5毫米厚度）于36－72小时内脱钙。
3． 硝酸脱钙液
是最常用的脱钙剂，用硝酸作脱钙液的缺点是形成亚硝酸而使溶液呈黄色，产生颜色即迅速影响脱钙速度，且组织的黄染会妨碍随后的染色反应。在硝酸内加入0.1％尿素可以防止变黄而使之无色，但尿素仅有暂时作用，一旦硝酸显淡黄时需要加入。
福尔马林－硝酸液（Clayden氏液）
配方：福尔马林 5ml
硝酸（比重1.41） 7.5－15ml
蒸馏水 加至 100ml
此处方中甲醛可部分地抑制硝酸的浸软作用，这即具有脱钙作用，又具有固定作用，硝酸脱钙迅速，组织不膨胀，掌握好脱钙时间可直接脱水，不影响染色效果。但最好先洗去硝酸。
横切人肋骨（5mm）用含7.5％硝酸液于1－2天内脱钙。
硝酸水溶液
配方：硝酸（用0.1尿素稳定） 5－10ml
蒸馏水 加至 100ml
此液用作常规脱钙剂，作用迅速，对组织不膨胀，对细胞的保存和染色比前者更好，能适用多种染色技术，但每日需要更换新鲜溶液，最好早晚各一次，一般1－3天完成。
横切人肋骨（5mm）在12－24小时内脱钙。
二、螯合剂脱钙
乙二胺四乙酸（EDTA）是用以脱钙地螯合剂。为有机化合物，有结合某些金属的能力，能结合钙盐，15%的溶液即起脱钙作用，组织用此方法脱钙，对组织破坏性小，即放置数月亦不致引起对组织的破坏，对以后大多数的染色技术皆可得到满意结果。
经10%中性福尔马林盐固定后，将组织移到50倍用磷酸盐缓冲剂缓冲至PH值等于7的5.5％EDTA内。
不超过5毫米厚度的小块组织在此液内每4－5天换液一次，更换三次后再每天换液一次以便较准确的确定脱钙终点。脱钙“终点”可用X射线方法或用草酸盐化学方法。
完全脱钙后将组织直接移到70%酒精内常规脱水，浸蜡，石蜡或火棉胶包埋。
三、脱钙步骤
1．取材：骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片。
2．固定：再以10%福尔马林固定2天。
3．将组织置于脱钙剂中，每日更换新鲜液、直至组织软化为止。
4．流水冲洗24小时（除酸）。
5．进行常规脱水，透明，浸蜡，切片。
四、鉴定脱钙是否彻底
确定脱钙“终点”三种方法：
1. 最常用的是最简单的方法――针刺，如果很容易被刺透，而且不感到阻力时，说明组织基本上脱钙完全，否则应继续脱钙。靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住，而且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤。
2．用X射线检查：看组织内是否仍有钙质。
3．用化学实验检查：
取5ml脱钙液用2M的NaOH（氢氧化钠）调整至中性，再加5％草酸钠或草酸铵1ml，液体混浊表示有钙质。迟至5分钟仍不混浊表示脱钙液中不含有钙质。
组织中仍有钙质时，一定量的钙离子会溶于脱钙液中，游离的钙会干扰脱钙作用的完成。显然，应在每次试验时完全更换，再试验中必须经过2－3小时间隔让钙溶解。
五．酸的中和
脱钙后水洗24小时，目的是除去组织中经无机酸浸渍后过多的酸，以免影响染色。再冲洗前应将组织用一种碱处理以使之脱酸呈中性，可用5％硫酸钾或硫酸钠处理过夜。（否则会引起组织膨胀）但直接转移到稀酒精（70％）内过12－18小时换液2次，再继续脱水，经无水酒精，氯仿透明，石蜡包埋，切片，整个过程其酸已全部除去，在多数情况下不仅不膨胀且对染色反应能有所改善。因此不冲洗对染色也没大碍，只是脱水剂被酸化。 上一篇：陈列标本的固定 下一篇：石蜡切片－组织的冲洗
